细菌工程菌在细胞内的表达主要分为两种形式，一种是在强启动子条件下的高效表达，由于蛋白质的过度表达，导致蛋白质立即高效不折叠而发生不规则卷曲，以固体颗粒形式堆积在细胞间质中。这称为包涵体，另一种为间质内可溶性表达，即折叠正常，具有生物活性。一般来说，只要细菌正常破壁，就可以离心分离的形式分离包涵体和可溶性表达蛋白。

　　大肠杆菌用于提取表达外源蛋白，在超声波破碎仪使用前，用含1%triton-X-100的PBS悬浮，然后破碎是有效的。1%triton-X-100的作用仍然明显，对其他几种细菌也有同样的作用。例如链霉菌等。

　　细菌沉淀直接加入样品1buffer，再加入5l巯基乙醇，充分混合，离心分离，煮沸10min，直接装样品。染色脱色工序如下：道。将胶水放入适量染色液微波炉加热1min(下次适当补充乙酸即可)，染色液大量清水(自来水即可)，微波炉煮10min即可。表达重组蛋白后，超声破碎细胞，采用冰浴，破400w、2s终止1s，但很快产生大量泡沫，影响破碎功率。pbs和tris缓冲液均如此，zui后破碎不，但我的目的蛋白在这些未破碎的细胞中。
　　1、之所以会产生气泡，是因为你的探针位置没有到位。超声波破碎机的探头必须靠近底部，约1cm(推荐距离底部0.5mm)。电力因机器而异，观察液面，虽然有变动，但请不要太激烈。
　　2、打碎3S10S，破碎20-30个循环观察效果。
　　3、还要注意探头的定位，如果听错了就要及时调整。另外，可以从菌浓度方面考虑。用超声波破碎时，请尝试增大体积，使振幅不超过60%。
　　试着超过4、8s停止8s，对部分菌体蛋白来说，常规方法不易退热，蛋白变性产生气泡，停止时间稍长为宜。这多见于包涵体形式的蛋白质。更换Branson超声波破碎机进行作业，由于耗电量少，可以适当缩短休眠时间。
　　二、几个需要注意的问题：
　　1、蛋白以包涵体形式表达，要求高破碎率，细胞碎片小，而另一蛋白以可溶形式表达，细胞碎片不能小。两种情况要求不同，但目的相同，均便于后期固液分离。
　　2、超声波中出现黑色沉淀物，说明超声波功率太强。3、超声时间过长，功率过高肯定会影响蛋白活性。

　　4、尽量防止泡沫的产生。