蛋白质测定仪（俗称定氮仪）以国际凯氏定氮法为依据，进行设计制造的，此仪器主机采用蒸气自动控制发生器，在液位稳压器的配合下，使蒸气在数十秒时间内平稳输出供蒸馏器使用。

执行机关控制下的碱液流经蒸馏管进入定量消化管，使固定在酸液里的氨在碱性条件下挥发。

第二执行机关控制下的蒸气对碱性条件的试样再进行蒸馏，使氨*挥发，挥发的氨被冷凝器冷凝下来，*地被固定在硼酸之中，然后用标准酸对其滴定到终点，计算出氮的含量，再乘以换算蛋白质的系数得出蛋白质的含量。

定氮仪操作步骤：

消化：

1.准备6个烧瓶，加标签。在烧瓶1、2和3中加入1.0ml适当浓度的蛋白质溶液。将样品添加到烧瓶底部，不要粘在瓶口和瓶颈上。然后，依次加入0.3g硫酸钾-硫酸铜接触剂，2.0ml浓硫酸和1.0ml 30％的过氧化氢。 4、5和6烧瓶用作空白对照，以确定试剂中的痕量氮含量并校正样品测定。 向烧瓶4、5和6中加入1.0ml蒸馏水代替样品溶液，其他所加试剂与烧瓶1、2和3相同。

2.将装有试剂的烧瓶放在消化架上，然后连接抽气装置。首先，用小火煮沸，然后烧瓶的碳化变成黑色并产生大量气泡。当泡沫消失并停止时，增加火力，使瓶中的液体稍微沸腾直到溶液澄清为止，然后继续加热以使消化液沸腾15分钟。消化过程中，应随时旋转烧瓶，以使内壁内的附着物质流入底部，以确保样品*消化。消化过程中释放出的气体中含有高度刺激性的SO2。因此，应从头到尾打开泵，将气体排放到自来水中。整个消化过程应在通风橱中进行。消化后，关闭火焰，将烧瓶冷却至室温。

蒸馏吸收：

蒸馏和吸收在微型中进行。凯氏定氮蒸馏设备有很多种，主要由产生蒸汽，氨蒸馏和吸收氨组成。

1.定氮仪仪器的洗涤

在安装氮气表之前，应按一般方法清洗和清洁所有零件。将使用的橡胶管和塞子浸入10％NaOH溶液中，煮沸约10分钟，洗涤并煮沸10分钟，然后洗涤数次，然后安装并固定在铁架平台上。在使用该仪器之前，必须用水蒸气清洗所有走线管，以除去可能残留在管道中的氨。每次测量样品前，可以将使用中的仪器清洗5分钟。对于长时间不使用的仪器，请重复蒸汽冲洗不少于3次，并检查仪器是否正常。仔细检查连接以确保没有空气泄漏。

首先，在蒸汽发生器中加入约2/3体积的蒸馏水，加几滴硫酸使其保持酸性，以避免水中氨气蒸发的影响，并加入少量沸石（或毛细管等）防爆沸腾。沿小玻璃杯的壁添加20ml蒸馏水，以使水通过插管流入反应室，但切勿将玻璃杯中的水排干。塞上杆玻璃塞以保持水密封，以防止漏气。发生蒸汽后，立即关闭废液排放管上的开关，以使蒸汽只能进入反应室，这会导致反应室中的水迅速沸腾。从反应器出来的蒸汽通过位于反应室上部的氮气固定球进入冷凝管，以进行冷却，并在冷凝管的下端放置一个锥形瓶以容纳冷凝液。从设定的氮气球开始加热的时间，连续煮5分钟，然后取下煤气灯。冲洗后，夹紧连接蒸汽发生器和集热器的橡胶管。由于气体冷却压力的降低，反应室中的废液将被自动泵入反应室的壳体中，并通过打开废液排出口夹将废液排出。清洗2-3次后，将装有硼酸指示剂混合物的锥形瓶置于冷凝器管下，以将冷凝水管的下端口*浸入溶液中，蒸馏1-2分钟，并观察溶液是否在锥形管中。瓶子变色了。如果没有变色，则清洁蒸馏单元。取下锥形瓶，蒸馏1-2分钟，用蒸馏水清洗冷凝器的下部端口，关闭煤气灯，凯氏定氮仪可用于样品测量。

2.无机氮标准样品的蒸馏吸收

由于氮测定操作繁琐，为了熟悉蒸馏和滴定的操作技术，初学者应首先使用无机氮标准样品进行重复练习，然后再测定未知的有机氮样品。通常将已知浓度的标准硫酸铵测试3次。

取五个干净的100ml锥形瓶，依次加入20ml 2％的硼酸溶液，3-4滴甲基红混合指示剂（紫红色），并盖好瓶口以备使用。取一个锥形瓶放在冷凝管的下端，然后将冷凝管的出口浸入溶液中。

注意：在执行此操作之前，必须打开收集器的活塞，以防止锥形瓶中的液体被吸回。准确地将2ml硫酸铵标准溶液吸到玻璃杯中，小心地提起棒形玻璃塞，使硫酸铵溶液缓慢流入蒸馏瓶中，用少量蒸馏水清洗小玻璃杯三遍，然后放入将其倒入蒸馏瓶中。然后，在带有量筒的小玻璃杯中加入10ml 30％NaOH溶液，使碱液缓慢流入蒸馏瓶中。当碱液尚未*流入时，关闭玻璃棒塞子。向小玻璃杯中加入约5ml蒸馏水，然后慢慢打开玻璃塞，使一半的水流入蒸馏瓶，一半的水留在小玻璃杯中以进行水封。关闭收集器的活塞并加热蒸汽发生器以进行蒸馏。由于氨的吸收，圆锥形烧瓶中的硼酸和指示剂的混合物从紫红色变为绿色。从变色的时间开始，再蒸馏3-5分钟，移动锥形烧瓶，使烧瓶中的液位离开冷凝器管的下部开口约LCM，用少量的水冲洗冷凝器管的下部开口蒸馏水，再继续蒸馏1分钟，取出锥形瓶，盖上盖子，准备滴定。初馏后，取下气体灯，将橡胶管夹在蒸汽发生器和收集器之间，反应后除去废液，用水冲洗小玻璃杯数次，然后除去废液。重复洗涤后，可以蒸馏下一个样品。根据上述方法，用标准硫酸铵进行两次。再用2ml蒸馏水代替标准硫酸铵两次以进行空白测定。在锥形烧瓶中滴定每次蒸馏的溶液。

3.未知样品和空白样品的蒸馏吸收

将三个消化的蛋白质样品和三个空白对照溶液依次蒸馏并吸收。向消化后的样品或空白对照溶液中加入5ml热蒸馏水，通过一个小玻璃杯将其加入反应室，然后用热蒸馏水将小玻璃杯洗涤3次，每次约3ml，然后将洗涤液倒入反应室。其他操作根据标准硫酸铵的蒸馏进行。由于消化液中硫酸钾的浓度很高，因此不容易从凯氏定氮瓶中倒出。必须添加5毫升热蒸馏水以将其稀释。如果有结晶，则必须稍微溶解。变热时，添加玻璃杯以使其流入反应室。此外，应注意的是，在清洗后仪器未*冷却时，应立即添加样品或空白对照溶液，否则消化液容易通过冷却管沉淀和结晶，从而造成堵塞。

滴定：

蒸馏后将样品和空白一起滴定。打开接收瓶盖，并用酸微滴定管滴定0.0100mol / l标准盐酸溶液。当溶液为深灰色时，用蒸馏水冲洗锥形瓶的内壁一次。如果摇动后仍变绿，请小心滴下另一滴标准盐酸溶液。摇动并观察瓶中溶液的颜色变化。如果深灰色在一两分钟内没有变化，则认为已到达滴定终点。如果是粉红色，则表明已经超过了滴定终点，可以从滴定消耗的标准盐酸溶液量中减去0.02ml，并且每组样品的氮测定终点的颜色必须*一致。空白对照溶液的接收瓶中溶液的颜色不变或略有变化，绿色尚未出现，因此无法滴定。记录每次滴定中消耗的标准盐酸溶液的毫升数，以进行计算。