YIJI 高多糖/酚植物线粒体 DNA 萃取试剂盒产品说明书（中文版）

主要用途

YIJI 高多糖/酚植物线粒体 DNA 萃取试剂是一种旨在通过物理或化学破膜及离心处理方法，从植物细

胞或组织中去除多糖和多酚之后，分离出完整而纯化的线粒体细胞器，然后进一步生物酶处理以获得高质

量的线粒体 DNA 的而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。适合于

各种新鲜的含有大量多糖和酚的植物组织，包括叶片（leaf）、谷粒（grain）、种子（seed）、以及培养细胞的线粒体核酸成分的分离。用于后续的杂交、克隆、酶切、PCR 分析等。产品即到即用，操作简易，性能

稳定，无核酶污染，萃取纯度和产量皆高。

技术背景

线粒体细胞器的研究是现代细胞生物学的zui重要的课题之一。线粒体成为生物衰老、古生物、细胞凋亡、

能量代谢等研究的主要对象。线粒体DNA的分离和定量以及突变分析是研究中*的。

产品内容

YIJI 清理液（Reagent A）        毫升

YIJI 裂解液（Reagent B）        毫升

YIJI 净化液（Reagent C）        毫升

YIJI 强化液（Reagent D）        毫升

YIJI 保存液（Reagent E）        毫升

YIJI 破膜液（Reagent F）        微升

YIJI 酶解液（Reagent G）   微升

YIJI 去干扰液（Reagent H）   毫升

YIJI 萃取液（Reagent I）    毫升

YIJI 浓缩液（Reagent J）     微升

YIJI 助沉液（Reagent K）      毫升

YIJI 沉淀液（Reagent L）      毫升

YIJI 纯化液（Reagent M）      毫升

YIJI 缓冲液（Reagent N）      1份

产品说明书

保存方式

保存 YIJI 净化液（Reagent C）YIJI 酶解液、（Reagent G）YIJI 萃取液、（Reagent I） YIJI和

助沉液（Reagent K）在－20℃冰箱里，其余的保存在 4℃冰箱里，有效保证 6 月

用户自备

15 毫升锥形离心管：用于线粒体初步制备物的存放

50 毫升锥形离心管：用于细胞或组织收集后离心或清洗

1.5 毫升离心管：用于保存线粒体

4℃台式离心机：用于沉淀细胞

4℃超速离心机：用于分离细胞器成分

微型台式离心机：用于沉淀核酸

DOUNCE 匀浆器：用于裂解细胞

58℃恒温水槽：用于孵育反应物

涡旋震荡仪：用于混匀

实验步骤

一、 植物组织线粒体 DNA 分离（物理法）

实验开始前，将试剂盒里的 YIJI 净化液（Reagent C）冻融，然后移出 xx 毫升 YIJI 净化液

（Reagent C）和 xx 毫升的 YIJI 裂解液（Reagent B）到 15 毫升锥形离心管里，混匀后，标记为

YIJI 裂解工作液，置入冰槽里备用。然后进行下列操作。

1． 准备好新鲜的植物组织（叶片、谷粒、种子等），并秤重以确定组织重量

2． （选择步骤）放进预冷的 50 毫升锥形离心管

3． （选择步骤）加入适量的（1 克组织需要 10 毫升）YIJI 清理液（Reagent A）清洗 1 次

4． 即刻用刀片切碎组织

5． 放进一个预冷的 15 毫升锥形离心管

6． 加入预冷的 xx 毫升 YIJI 裂解工作液

7． 涡旋震荡 5 秒，充分混匀

8． 即刻放进预冷的 DOUNCE 匀浆器，在冰槽里用研磨棒匀化组织（约 80 下）（注意：参见注意事项 7）

9． 将所有组织匀浆物移入 15 毫升锥形离心管，放进 4℃台式离心机离心 10 分钟，速度为 1500g

10．小心移出上清液（注意：不要触碰沉淀物）到另一个新的预冷的 15 毫升锥形离心管（如果上清液含有

肉眼可见的残渣，重复离心 5 分钟一次，速度为 3000g）——此步骤去除细胞壁、淀粉颗粒、细胞核

和未溶解的细胞以及完整质体等残渣

11．放进 4℃超速离心机离心 10 分钟，速度为 10000g

12．小心抽去上清液，保留沉淀颗粒——此步骤获得线粒体沉淀物（注意：如果暂时停止操作，须暂时放

进－70℃冰箱里）

13．加入 xx 微升 YIJI 破膜液（Reagent F）到线粒体颗粒样品中

14．涡旋震荡 15 秒，混匀颗粒群

15．转入 1.5 毫升离心管

16．置入冰槽中孵育 15 分钟（注意：参见注意事项 12）

17．加入 xx 微升 YIJI 酶解液（Reagent G）

18．加入 xx 微升 YIJI 去干扰液（Reagent H）

19．用 200 微升枪头上下抽吸混匀

20．放进微型台式离心机瞬时离心 5 秒钟，速度为 500g（或 2000RPM，例如 eppendorf 5415）

21．放进 58℃恒温水槽孵育 2 小时（注意：可以孵育 4 至 16 小时，增加萃取产量；参见注意事项 12）

22．置于室温下冷却 15 分钟，直至处于室温状态（或置于冰槽里 15 至 30 秒）

23．加入 xx 微升 YIJI 萃取液（Reagent I）（注意：使用前摇匀）

24．涡旋震荡 5 秒

25．放进微型台式离心机离心 5 分钟，速度为 16000g（或 13000RPM，例如 eppendorf 5415）

26．移出上层液相溶液到新的 1.5 毫升离心管（注意：切莫触碰液相交界面上的白色膜状物）

27．加入 xx 微升 YIJI 浓缩液（Reagent J）到新的离心管

28．加入 xx 微升 YIJI 助沉液（Reagent K）

29．加 xx 微升 YIJI 沉淀液（Reagent L）

30．在涡旋震荡仪上震荡 5 秒，充分混匀

31．放进微型台式离心机离心 15 分钟，速度为 16000g（或 13000RPM，例如 eppendorf 5415）（注意：离

心前做好方位标记，以便离心后观察管底沉淀颗粒）

32．小心抽掉上清液

33．加入 xx 毫升 YIJI 纯化液（Reagent M）

34．放进微型台式离心机离心 5 分钟，速度为 16000g（或 13000RPM，例如 eppendorf 5415）

35．小心抽掉上清液

36．空气中晾干沉淀颗粒群

37．加入 xx 微升 YIJI 缓冲液（Reagent N）

38．溶解后放进－20℃冰箱长期保存或移出 2 微升进行 PCR 反应

二、 植物组织线粒体 DNA 分离（化学法）

实验开始前，将试剂盒里的 YIJI 净化液（Reagent C）冻融，然后移出 xx 毫升 YIJI 净化液

（Reagent C）和 xx 毫升的 YIJI 裂解液（Reagent B）到 15 毫升锥形离心管里，混匀后，标记为

YIJI 裂解工作液，置入冰槽里备用。然后进行下列操作。

1． 准备好新鲜的植物组织（叶片、谷粒、种子等），并秤重以确定组织重量

2． （选择步骤）放进预冷的 50 毫升锥形离心管

3． （选择步骤）加入适量的（1 克组织需要 xx 毫升）YIJI 清理液（Reagent A）清洗 1 次

4． 移入一个液氮冻存管

5． 即刻放进液氮罐过夜

6． 次日从液氮罐里取出，即刻（zui快速度）碾碎组织成粉末（注意：切莫使组织冻融）

7． 放进一个 15 毫升锥形离心管

8． 加入预冷的 xx 毫升 YIJI 裂解工作液

9． 涡旋震荡 5 秒，充分混匀

10．在冰槽里孵育 2 分钟，期间涡旋震荡 5 秒一次

11．加入预冷的 xx 微升 YIJI 强化液（Reagent D）

12．涡旋震荡 5 秒，充分混匀

13．在冰槽里孵育 5 分钟，期间涡旋震荡 5 秒二次（注意：参见注意事项 8）

14．加入预冷的 xx 毫升 YIJI 保存液（Reagent E），轻轻摇动试管混匀

15．放进 4℃台式离心机离心 10 分钟，速度为 1500g

16．小心移出上清液（注意：不要触碰沉淀物）到另一个新的预冷的 15 毫升锥形离心管（如果上清液含有

肉眼可见的残渣，重复离心 5 分钟一次，速度为 3000g）——此步骤去除细胞壁、淀粉颗粒、细胞核

和未溶解的细胞以及完整质体等残渣

17．放进 4℃超速离心机离心 10 分钟，速度为 10000g

18．小心抽去上清液，保留沉淀颗粒——此步骤获得线粒体沉淀物（注意：如果暂时停止操作，须暂时放

进－70℃冰箱里）

19．加入 xx 微升 YIJI 破膜液（Reagent F）到线粒体颗粒样品中

20．涡旋震荡 15 秒，混匀颗粒群

21．转入 1.5 毫升离心管

22．置入冰槽中孵育 15 分钟（注意：参见注意事项 12）

23．加入 xx 微升 YIJI 酶解液（Reagent G）

24．加入 xx 微升 YIJI 去干扰液（Reagent H）

25．用 xx 微升枪头上下抽吸混匀

26．放进微型台式离心机瞬时离心 5 秒钟，速度为 500g（或 2000RPM，例如 eppendorf 5415）

27．放进 58℃恒温水槽孵育 2 小时（注意：可以孵育 4 至 16 小时，增加萃取产量；参见注意事项 12）

28．置于室温下冷却 15 分钟，直至处于室温状态（或置于冰槽里 15 至 30 秒）

29．加入 xx 微升 YIJI 萃取液（Reagent I）（注意：使用前摇匀）

30．涡旋震荡 5 秒

31．放进微型台式离心机离心 5 分钟，速度为 16000g（或 13000RPM，例如 eppendorf 5415）

32．移出上层液相溶液到新的 1.5 毫升离心管（注意：切莫触碰液相交界面上的白色膜状物）

33．加入 xx 微升 YIJI 浓缩液（Reagent J）到新的离心管

34．加入 xx 微升 YIJI 助沉液（Reagent K）

35．加入 xx 微升 YIJI 沉淀液（Reagent L）

36．在涡旋震荡仪上震荡 5 秒，充分混匀

37．放进微型台式离心机离心 15 分钟，速度为 16000g（或 13000RPM，例如 eppendorf 5415）（注意：离

心前做好方位标记，以便离心后观察管底沉淀颗粒）

38．小心抽掉上清液

39．加入 xx 毫升 YIJI 纯化液（Reagent M）

40．放进微型台式离心机离心 5 分钟，速度为 16000g（或 13000RPM，例如 eppendorf 5415）

41．小心抽掉上清液

42．空气中晾干沉淀颗粒群

43．加入 xx 微升 YIJI 缓冲液（Reagent N）

44．溶解后放进－20℃冰箱长期保存或移出 2 微升进行 PCR 反应

三、 植物细胞或原生质体线粒体 DNA 分离（物理法）

实验开始前，将试剂盒里的 YIJI 净化液（Reagent C）冻融，然后移出 xx 毫升 YIJI 净化液

（Reagent C）和 xx 毫升的 YIJI 裂解液（Reagent B）到 15 毫升锥形离心管里，混匀后，标记为

YIJI 裂解工作液，置入冰槽里备用。然后进行下列操作。

1． 准备 5 X 107植物细胞或原生质体

2． 移入一个 50 毫升锥形离心管

3． 放进台式离心机离心 10 分钟，速度为 200g

4． 小心抽去上清液

5． 加入 xx 毫升预冷的 YIJI 清理液（Reagent A），混匀细胞

6． 放进台式离心机离心 10 分钟，速度为 300g

7． 小心抽去上清液

8． 加入预冷的 xx 毫升 YIJI 裂解工作液

9． 涡旋震荡 5 秒，充分混匀细胞颗粒群

10．即刻放进预冷的 DOUNCE 匀浆器，在冰槽里用研磨棒匀化细胞（约 80 下）（注意：参见注意事项 7）

11．将所有细胞匀浆物移入 15 毫升锥形离心管，放进 4℃台式离心机离心 10 分钟，速度为 1500g

12．小心移出上清液（注意：不要触碰沉淀物）到另一个新的预冷的 15 毫升锥形离心管（如果上清液含有

肉眼可见的残渣，重复离心 5 分钟一次，速度为 3000g）——此步骤去除细胞壁、淀粉颗粒、细胞核

和未溶解的细胞以及完整质体等残渣

13．放进 4℃超速离心机离心 10 分钟，速度为 10000g

14．小心抽去上清液，保留沉淀颗粒——此步骤获得线粒体沉淀物（注意：如果暂时停止操作，须暂时放

进－70℃冰箱里）

15．加入 xx 微升 YIJI 破膜液（Reagent F）到线粒体颗粒样品中

16．涡旋震荡 15 秒，混匀颗粒群

17．转入 1.5 毫升离心管

18．置入冰槽中孵育 15 分钟（注意：参见注意事项 12）

19．加入 xx 微升 YIJI 酶解液（Reagent G）

20．加入 xx 微升 YIJI 去干扰液（Reagent H）

21．用 200 微升枪头上下抽吸混匀

22．放进微型台式离心机瞬时离心 5 秒钟，速度为 500g（或 2000RPM，例如 eppendorf 5415）

23．放进 58℃恒温水槽孵育 2 小时（注意：可以孵育 4 至 16 小时，增加萃取产量；参见注意事项 12）

24．置于室温下冷却 15 分钟，直至处于室温状态（或置于冰槽里 15 至 30 秒）

25．加入 xx 微升 YIJI 萃取液（Reagent I）（注意：使用前摇匀）

26．涡旋震荡 5 秒

27．放进微型台式离心机离心 5 分钟，速度为 16000g（或 13000RPM，例如 eppendorf 5415）

28．移出上层液相溶液到新的 1.5 毫升离心管（注意：切莫触碰液相交界面上的白色膜状物）

29．加入 xx 微升 YIJI 浓缩液（Reagent J）到新的离心管

30．加入 xx 微升 YIJI 助沉液（Reagent K）

31．加入 xx 微升 YIJI 沉淀液（Reagent L）

32．在涡旋震荡仪上震荡 5 秒，充分混匀

33．放进微型台式离心机离心 15 分钟，速度为 16000g（或 13000RPM，例如 eppendorf 5415）（注意：离

心前做好方位标记，以便离心后观察管底沉淀颗粒）

34．小心抽掉上清液

35．加入 xx 毫升 YIJI 纯化液（Reagent M）

36．放进微型台式离心机离心 5 分钟，速度为 16000g（或 13000RPM，例如 eppendorf 5415）

37．小心抽掉上清液

38．空气中晾干沉淀颗粒群

39．加入 xx 微升 YIJI 缓冲液（Reagent N）

40．溶解后放进－20℃冰箱长期保存或移出 2 微升进行 PCR 反应

四、 植物细胞或原生质体线粒体 DNA 分离（化学法）

实验开始前，将试剂盒里的 YIJI 净化液（Reagent C）冻融，然后移出 xx 毫升 YIJI 净化液

（Reagent C）和 xx 毫升的 YIJI 裂解液（Reagent B）到 15 毫升锥形离心管里，混匀后，标记为

YIJI 裂解工作液，置入冰槽里备用。然后进行下列操作。

1． 准备 5 X 107植物细胞或原生质体

2． 移入一个 50 毫升锥形离心管

3． 放进台式离心机离心 10 分钟，速度为 200g

4． 小心抽去上清液

5． 加入 xx 毫升预冷的 YIJI 清理液（Reagent A），混匀细胞

6． 放进台式离心机离心 10 分钟，速度为 300g

7． 小心抽去上清液

8． 加入预冷的 xx 毫升 YIJI 裂解工作液

9． 涡旋震荡 5 秒，充分混匀

10．（选择步骤）超声波处理 1 分钟

11．在冰槽里孵育 2 分钟，期间涡旋震荡 5 秒一次

12．加入预冷的 xx 微升 YIJI 强化液（Reagent D）

13．涡旋震荡 5 秒，充分混匀

14．在冰槽里孵育 5 分钟，期间涡旋震荡 5 秒二次（注意：参见注意事项 8）

15．加入预冷的 xx 毫升 YIJI 保存液（Reagent E），轻轻摇动试管混匀

16．放进 4℃台式离心机离心 10 分钟，速度为 1500g

17．小心移出上清液（注意：不要触碰沉淀物）到另一个新的预冷的 15 毫升锥形离心管（如果上清液含有

肉眼可见的残渣，重复离心 5 分钟一次，速度为 3000g）——此步骤去除细胞壁、淀粉颗粒、细胞核

和未溶解的细胞以及完整质体等残渣

18．放进 4℃超速离心机离心 10 分钟，速度为 10000g

19．小心抽去上清液，保留沉淀颗粒——此步骤获得线粒体沉淀物（注意：如果暂时停止操作，须暂时放

进－70℃冰箱里）

20．加入 xx 微升 YIJI 破膜液（Reagent F）到线粒体颗粒样品中

21．涡旋震荡 15 秒，混匀颗粒群

22．转入 1.5 毫升离心管

23．置入冰槽中孵育 15 分钟（注意：参见注意事项 12）

24．加入 xx 微升 YIJI 酶解液（Reagent G）

25．加入 xx 微升 YIJI 去干扰液（Reagent H）

26．用 200 微升枪头上下抽吸混匀

27．放进微型台式离心机瞬时离心 5 秒钟，速度为 500g（或 2000RPM，例如 eppendorf 5415）

28．放进 58℃恒温水槽孵育 2 小时（注意：可以孵育 4 至 16 小时，增加萃取产量；参见注意事项 12）

29．置于室温下冷却 15 分钟，直至处于室温状态（或置于冰槽里 15 至 30 秒）

30．加入 xx 微升 YIJI 萃取液（Reagent I）（注意：使用前摇匀）

31．涡旋震荡 5 秒

32．放进微型台式离心机离心 5 分钟，速度为 16000g（或 13000RPM，例如 eppendorf 5415）

33．移出上层液相溶液到新的 1.5 毫升离心管（注意：切莫触碰液相交界面上的白色膜状物）

34．加入 xx 微升YIJI 浓缩液（Reagent J）到新的离心管

35．加入 xx 微升 YIJI 助沉液（Reagent K）

36．加入 xx 微升 YIJI 沉淀液（Reagent L）

37．在涡旋震荡仪上震荡 5 秒，充分混匀

38．放进微型台式离心机离心 15 分钟，速度为 16000g（或 13000RPM，例如 eppendorf 5415）（注意：离

心前做好方位标记，以便离心后观察管底沉淀颗粒）

39．小心抽掉上清液

40．加入 xx 毫升 YIJI 纯化液（Reagent M）

41．放进微型台式离心机离心 5 分钟，速度为 16000g（或 13000RPM，例如 eppendorf 5415）

42．小心抽掉上清液

43．空气中晾干沉淀颗粒群

44．加入 xx 微升 YIJI 缓冲液（Reagent N）

45．溶解后放进－20℃冰箱长期保存或移出 2 微升进行 PCR 反应

注意事项

1． 本产品为 10 次操作（1 克植物组织或 5 X 107细胞）

2． 线粒体操作均须在 4℃或以下状态下进行

3． 操作时，须无菌操作，避免污染母液，尤其是 YIJI 裂解液（Reagent B）和 YIJI 保存液

（Reagent E）

4． 建议使用足够的组织或细胞量

5． 建议植物组织使用组织匀浆器操作；德国的 BRAUN 细胞匀浆器zui为理想

6． 建议严格控制操作时间

7． 通常匀化次数为 80 下达到 80％的细胞裂解为理想状态，但不同的组织或细胞类型会存在差异。用户

可以通过显微镜观察 3 微升匀浆物的细胞裂解程度：完整细胞呈现发亮的圆环。低于 50％可以增加匀

化次数

8． 通常孵育 5 分钟达到 80％的细胞裂解为理想状态，但不同的组织或细胞类型会存在差异。用户可以通

过显微镜观察 3 微升裂解物的细胞裂解程度：完整细胞呈现发亮的圆环。低于 50％可以增加孵育时间

和涡旋震荡次数

9． YIJI 裂解液（Reagent B）具有强力吸附并去除多糖和酚类物质的作用

10．不同组织，其线粒体含量不同；通常 1 克植物组织的线粒体含量为 10 至 50 微克线粒体蛋白

11．试剂中的溶液使用前摇匀；YIJI 酶解液（Reagent G）需放进 37℃冻融少许；为避免反复冻融，

建议适量分装

12．可以通过增加线粒体溶解时间（30 分钟）和酶解时间（直至 16 小时），获得大量的 DNA 产量

13．通常 1 克植物组织或 5 X 107细胞中提取的线粒体DNA达 10 至 20 微克

14．本产品所获得的线粒体DNA纯度和产量zui为理想，确保无核DNA和外源性DNA污染

15．本公司提供系列植物线粒体分析技术产品

质量标准

1． 本产品经鉴定性能稳定

2． 本产品经鉴定无核酶污染

3． 本产品经鉴定萃取产量和纯化程度高

4． 本产品经鉴定无基因组 DNA 污染