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荧光偏振免疫分析
点击次数：337 发布时间：2012-5-10
荧光偏振免疫分析法（fluorescence polarization immunoassay，FPIA）是一种定量免疫分析技术，其基本原理是荧光物质经单一平面的蓝偏振光（485nm）照射后，吸收光能跃入激发态，随后回复至基态，并发出单一平面的偏振荧光（525nm）。偏振荧光的强弱程度与荧光分子的大小呈正相关，与其（受激发时）转动的速度呈反相关。FPIAzui适宜检测小至中等分子物质，常用于药物、激素的测定。
FPIA采用竞争反应的原理，在缺乏未标记分析物（通常是待测样品）时荧光信号zui强；加入末标记分析物后，在已标记和未标记样品之间的竞争将减弱荧光信号。荧光信号强度与游离的分析物的浓度成正比，与待测样品中未标记分析物的浓度成反比。通过测定一系列已知浓度的标准晶，绘制竞争结合抑制标准曲线。经与标准反应曲线比较而得到定量值。以测定半抗原药物的浓度为例，反应系统内除待测药物外，同时加入一定量用荧光物质标记的相应药物（小分子），二者与有*的特异性抗体（大分子）竞争结合。当待测药物浓度高时，经过竞争，与大部分抗体结合，而标记药物则呈游离的小分子状态，因此在液相中转动速度较快，测得的偏振荧光强度也较低。反之，待测药物浓度低时，大部分标记药物与抗体结合，形成大分子的标记抗原抗体复合物，在液相中转动速度较慢，此时检测到的偏振荧光强度也较高。测定反应系统的偏振光大小，从标准曲线上就可地得知样品中待测药物的相应含量。
FPIA法的优点是灵敏度高，例如测定Digoxin的灵敏度可达0．2ng／m1，精密度高、速度快、操作简便，样品用量少，仪器不需要每日校准。缺点是仪器设备昂贵，药品试剂盒专属性强，需进口。