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支原体污染:组织培养应用中的关键问题

阅读:228发布时间:2011-10-14

支原体污染:组织培养应用中的关键问题

何谓支原体?

作为一种非常之小的细菌,支原体的特点是没有精密的细胞壁。此细胞壁缺失,导致有机体具有可塑性,使得支原体形状具有高度的多变性,从球状到分支长丝状均有呈现,且大小直径从0.15到0.3µm之间不等。由于其可塑性,支原体可以通过0.2µm级(细菌截留)过滤器,此外,由于其细胞壁缺失,支原体能够耐受某些阻碍细菌细胞壁合成的抗生素(譬如*)。

 

支原体为何应当受到我们的重视?

支原体是细胞培养中的常见污染物。由于其尺寸非常之小,且生长速度较慢,利用常规实验室方法难以辨认污染物。然而,对于任何受其感染的细胞培养,支原体都具有隐伏性的影响。譬如,包含一百万个哺乳动物细胞的培养基,可被多达5亿个支原体感染(Stanbridge,1981)。存在如此巨大数量的污染物,将会强烈地影响被感染宿主细胞的结构和功能,譬如:

 

  •            改变细胞生长速率
  •            抑制或刺激细胞转化
  •            潜在有害的形态变异
  •            改变DNA、RNA以及蛋白质合成
  •            改变酶作用
  •            染色体异常
  •            减少或增加病毒产量
  •            耗尽生长培养基中的营养成分
  •            改变细胞表面抗原特性
  •            降低肿瘤细胞的恶性

 

参考文献: Stanbridge, Eric J. “支原体检测-获得科学准确性的必要手段' Israel J Med Sci 17: 563-568 (1981).

 

鉴于支原体污染对于培养细胞的不利影响,显而易见,对于任何源自受到支原体感染的细胞培养相关数据,其准确性均有待置疑,并应怀着谨慎和怀疑的态度处理这些数据(Stanbridge,1981)。

 

选用何种孔径的滤膜,方能有效去除支原体?

利用0.1µm级过滤器,能够截留支原体。Pall Life Sciences出品的0.1µm级Supor®滤膜,配备亲水性本质的聚醚砜滤膜,以去除支原体。Pall公司多种实验室过滤器产品中均整合了此滤膜,以作为组织和细胞培养应用的理想之选。

利用Pall公司0.1µm级滤膜,可以zui大程度地保障支原体不会藉由血清(或含有血清的介质)导入培养基。


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