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革兰氏染色法

阅读:2445发布时间:2012-4-12

革兰氏染色法是细菌学中zui常用的一种鉴别染色法。 

   

     

    1.葡萄球菌和大肠杆菌混合菌液。

    2.结晶紫染色液。

    3.革兰氏碘液。

    495%酒精。

    5.番红染液。

    6.载玻片。

    

    一、涂片标本的制备(见实验一)

    二、革兰氏染色法 

    1.初染:在上述已固定的涂片上,滴加结晶紫染液,染色1分钟,水洗。

    2.媒染:滴加革兰氏碘液,作用1—3分钟,水洗。

    3.脱色:滴加 95%酒精,并频频摇动玻片,至无紫色脱出为止(约20秒),水洗。

    4.复染:加番红染液,复染半分钟,水洗,用吸水纸印干后,油镜检查。

    结果:视野中可以察见两种细菌:

    葡萄球菌:紫色、球形、葡萄状排列。

    大肠杆菌:红色、杆状、散在排列。

【附】革兰氏染色法各种染液的配制 

    一、结晶紫(Cystal   violet)染液

    结晶紫    2.0g

    草酸铵    0.8g

    95%酒精 20ml

    蒸馏水    80ml

    先将结晶紫溶于酒精,草酸铵溶于蒸馏水中,然后将两液混合,静置48小时使用。此染液稳定,置密闭的棕色瓶中可储存数月。

    二、革兰氏碘液

             1.0g

    *     2.0g

    蒸馏水     300ml

先将碘与*混合,加水少许,略加摇动,待碘*溶解后再加蒸馏水至定量。

三、脱色剂:95%酒精

四、复染剂:番红(沙黄Safranine O)染液

沙黄(Safranine O) 0.25g

95%乙醇 10ml

蒸馏水 适量

将沙黄溶解于95%乙醇中,待*溶解再加蒸馏水至100ml


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