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上海闪晶分子生物科技有限公司


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蛋白表达与纯化技术服务 检测服务

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参   考   价: 3500

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具体成交价以合同协议为准

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厂商性质生产商

所  在  地上海市

更新时间:2023-05-11 12:46:41浏览次数:73次

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经营模式:生产厂家

商铺产品:72条

所在地区:上海上海市

联系人:陈先生 (经理)

产品简介

步骤1. 目标基因全基因合成:

从基因库中搜索目标蛋白的cDNA序列。如果我们的cDNA文库中有这个基因,我们免费提供给客户。
根据选用的表达系统对cDNA进行密码子优化,密码子优化。
合成设计好的基因序列。

详细介绍

步骤1. 目标基因全基因合成:

  1. 从基因库中搜索目标蛋白的cDNA序列。如果我们的cDNA文库中有这个基因,我们免费提供给客户。

  2. 根据选用的表达系统对cDNA进行密码子优化,密码子优化。

  3. 合成设计好的基因序列。

提供给客户:目标基因(在T载体或常规穿梭载体上)及测序报告。
价格:3.80元/碱基,如果客户直接提供构建好的质粒,则免去这部分费用.
时间:2~3周,根据基因的大小而定.详见全基因合成服务
步骤2. 目标基因亚克隆:

  1. 扩增并抽提含有目标基因的载体质粒。

  2. 将目标基因亚克隆到合适的表达质粒上。

  3. 测序验证构建质粒的准确性。

  4. 闪晶生物免费提供如下表达载体:

提供给客户:正确构建的重组表达质粒,含重组质粒的DH5α菌株及测序报告。
价格:免费 
时间:1-2周
步骤3. E. coli表达菌株转化及筛选:

  1. 扩增并抽提构建好的表达质粒。

  2. 将表达质粒转化到高效的E.Coli表达菌株中。

  3. 至少挑选5个阳性克隆于LB培养基中扩增并诱导表达目标蛋白。

  4. SDS-PAGE电泳检测培养后中目标蛋白的表达情况,并挑选合适的单克隆菌株用于目标蛋白的表达。

  5. 可提供表达菌株:DH5α,  , JM115, BL21 (DE3), BL21 (DE3) pLys, XL1 Blue, XL10 Golden, Rosetta-gami。

提供给客户:重组质粒的表达菌株及表达检测报告。
价格:免费
时间:1周
步骤4. 目标蛋白表达及纯化:

  1. 摇瓶培养1L重组细菌,诱导表达目标蛋白。

  2. 通过亲和,离子交换,疏水及凝胶过滤等多种层析方法纯化表达的重组蛋白。

  3. 利用蛋白酶去除不需要的纯化标签,再纯化获得所需的目标蛋白(可选,构建表达载体时需加入合适的蛋白酶切位点)。

  4. 通过SDS-PAGE电泳检测每步结果并控制最终产品质量。

  5. 通过Western-blot验证目标蛋白正确性。

提供给客户:纯化好的目标蛋白1~5mg及纯化报告。


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