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微囊藻毒素LR（MC-LR）ELISA试剂盒说明书

时间：2013/4/20阅读：1013

本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断。

微囊藻毒素LR（MC-LR）定量检测试剂盒（ELISA）

使用说明书

【试剂盒名称】

微囊藻毒素LR（MC-LR）定量检测试剂盒（ELISA）

【试剂盒用途】

定量检测组织及相关液体样本中微囊藻毒素LR（MC-LR）的含量。

【检测原理】

本试剂盒采用双抗体一步夹心酶联免疫吸附法（ELISA）。将标准品、待测样本加入到预先包被微囊藻毒素LR（MC-LR）单克隆抗体透明酶标包被板中，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分，再加入酶标工作液，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分。依次加入底物A、B，底物（TMB）在辣根过氧化物酶（HRP）催化下转化为蓝色产物，在酸的作用下变成黄色，颜色的深浅与样品中微囊藻毒素LR（MC-LR）浓度呈正相关，450nm波长下测定OD值，根据标准品和样品的OD值，计算样本中微囊藻毒素LR（MC-LR）含量。

【试剂盒组成】

1	酶标包被板	12孔×8条	7	显色剂B液	6mL
2	标准品	0.3mL×6管	8	终止液	6mL
3	20倍浓缩洗涤液	25mL	9	说明书	1份
4	样本稀释液	6mL	10	封板膜	2张
5	酶标试剂	10mL	11	密封袋	1个
6	显色剂A液	6mL

备注：标准品（S5→S0）浓度依次为：800、400、200、100、50、0 ng/L.

【需要而未提供的试剂和器材】

1、37℃恒温箱

2、标准规格酶标仪

3、精密移液器及一次性吸头

4、蒸馏水

5、一次性试管

6、吸水纸

【操作步骤】

1、准备：从冰箱取出试剂盒，室温复温平衡30分钟。

2、配液：用蒸馏水将20倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。

3、加标准品和待测样本：取足够数量的酶标包被板，固定于框架上，分别设置标准品孔、待测样本孔和空白对照孔，记录各孔位置，在标准品孔中加入标准品50μL；待测样本孔中先加入待测样本10μL，再加样本稀释液40μL（即样本稀释5倍）；空白对照孔不加。

4、加酶标工作液：每孔加入酶标工作液100μL，空白对照孔不加。

5、温育：37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

6、洗板：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机按说明书操作洗板）。

7、显色：每孔先加入显色剂A 液50μL，再加入显色剂B液 50μL，平板混匀器混匀30s（或用手轻轻震荡混匀30s），37℃避光显色15min。

8、终止：取出酶标板，每孔加终止液50μL，终止反应（颜色由蓝色立转黄色）。

9、测定：以空白孔调零，在终止后15分钟内，用450nm波长测量各孔的吸光值（OD值）。

10、计算：根据标准品的浓度及对应的OD值，计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样本的OD值，在回归方程上计算出对应的样品浓度，也可以使用各种应用软件来计算。zui终浓度为实际测定浓度乘以稀释倍数。

【样本要求】

1、样本不能含叠氮钠（NaN₃），因为叠氮钠（NaN₃）是辣根过氧化物酶（HRP）的抑制剂。

2、标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能立即试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。

3、样本应充分离心，不得有溶血及颗粒。

【注意事项】

1、实验严格按照说明书的操作进行，实验结果判定必须以酶标仪读数为准。

2、酶标包被板开封后如未用完，应立即装入密封袋中加干燥剂保存。

3、建议所有的标准品、样本和空白对照都做双份检测，取平均值，以减小实验误差。

4、牢记样本已经稀释5倍，计算结果乘以5才是样本实际浓度。

5、若显色过浅，可适当延长底物温育时间。

6、为避免交叉污染，标准品、样本和空白对照每加一个就要更换一次吸头；酶标工作液、样本稀释液和底物等公共组分，要悬臂加样，不得碰到微孔；不得重复使用封板膜。

7、试剂盒保质期内使用，不同批号的试剂不得混用。

8、底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。

【操作程序总结】

准备试剂，样品和标准品

加入准备好的样品和标准品

加入酶标试剂，37℃反应60分钟

洗板5次，加入显色液A、B，37℃显色15分钟

加入终止液

15分钟之内读OD值

计算

【检测范围】

0ng/L - 800ng/L

【规格】

96T/盒

【贮藏】

2-8℃，避光防潮保存。

【有效期】

6个月

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