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猪乙型脑炎病毒抗体（IgG）ELISA诊断试剂盒说明书

时间：2012/3/9阅读：1087

【产品名称】

通用名称：猪乙型脑炎病毒抗体（IgG）诊断试剂盒（酶联免疫法）

英文名称：Porcine Japanese B Encephalitis Virus Antibody Test Kit （ELISA）, JEV Ab

【包装规格】

96×2测试/盒

【预期用途】

本试剂盒用于定性测定猪血清中日本乙型脑炎病毒（又称流行性乙型脑炎）IgG抗体。用于评估猪场猪乙型脑炎病毒疫苗免疫状况，感染猪的血清学诊断以及猪乙型脑炎病毒病的流行病学调查。

【检验原理】

本试剂盒应用固相酶联免疫吸附试验（ELISA）原理，由包被有高纯度的猪乙型脑炎抗原的微孔反应板、辣根过氧化物酶标记的抗猪IgG及其它试剂配套组成。其反应机理为包被抗原与样本中的JEV-IgG结合，再与酶标抗猪IgG抗体形成“包被抗原+JEV-IgG+酶标抗猪IgG抗体”复合物，加入显色剂，通过酶催化反应显色。显色深浅与JEV-IgG的量成正比，当显色超过设定的临界值时结果判为阳性，表明免疫有效或有自然感染。

【主要组成成份】

1．	JEV抗原包被板	96T×2块	包被有JEV抗原
2．	酶标记物（黄盖）	22ml×1瓶	含辣根过氧化物酶标记的抗猪IgG抗体
3．	样本稀释液（透明盖）	50ml×1瓶	主要成份为0.01M PBS缓冲液
4．	浓缩洗涤液（20×）（白盖）	50ml×1瓶	PBST缓冲液，用前用去离子水20倍稀释
5．	JEV-IgG阴性对照血清（绿盖）	1.5ml×1瓶	主要成份为JEV-IgG阴性血清
6．	JEV-IgG阳性对照血清（红盖）	1.5ml×1瓶	主要成份为JEV-IgG阳性血清
7．	显色剂A（紫盖）	12ml×1瓶	主要成份为过氧化脲
8．	显色剂B（黄盖）	12ml×1瓶	主要成份为TMB
9．	终止液（蓝盖）	12ml×1瓶	主要成份为HF
10．	盖板膜	6张
11．	说明书	1份

不同批号的试剂组份不可混用。

【储存条件及有效期】

于2℃～8℃避光保存，防止冷冻，有效期6个月。

【适用仪器】

1．酶标仪，单波长630nm测量。

2．ELISA用洗板机。

3．微量移液器。

4．水浴箱或恒温箱。

5．微量振荡器。

【样本要求】

1．本试剂检测的样本为猪血清，样本应无菌采集，2℃～8℃贮存不超过一周，长期应在-20℃以下保存。

2．避免使用严重溶血、有沉淀物、含悬浮纤维蛋白及污染长菌的样本。

3．样本中含有常规用量的EDTA、枸橼酸钠或肝素钠等抗凝剂不影响本实验。

【检验方法】

1．加样：根据样本数量，取所需板条。设空白对照1孔（不加任何液体）；设阴、阳性对照各2孔，分别加入不稀释的阴、阳性对照血清100ul于相应孔中。其余为样本孔，用样品稀释液将待检样品40倍稀释后混匀（如将6μL样本加到234μL样品稀释液中），每孔加入稀释好的样本100μL。

2．温育：加好样后振荡10秒，充分混匀，置37℃温育30分钟。

3．洗板：甩去孔内液体，用洗涤液（浓缩洗涤液用去离子水以20倍稀释）注满反应板孔，洗涤3次，每次停留3分钟，zui后一次洗后拍干。

4．加酶：每孔加酶标记物100ul，注意：空白孔不加酶标记物，也不加其他任何液体。

5．温育：置37℃温育30分钟。

6．洗板：同上洗涤。

7．显色：每孔加显色剂A、B各50ul，振荡混匀，室温（25℃）避光反应10分钟。

8．终止：每孔加终止液50ul，振荡10秒，充分混匀。终止后10分钟内读数。

9．读数：用酶标仪单波长630nm以空白孔调零，读取各孔吸光度值（A值）。注意：若酶标仪读数前没有以空白孔调零，则所得的结果均应减去空白孔A值再做判定。

10．结果判定：

样品A值大于0.4，判为JEV-IgG阳性；样品A值在0.2到0.4之间，判为JEV-IgG可疑；样品A值小于0.2，判为JEV-IgG阴性。

阴性对照血清A值应小于0.20，阳性对照血清A值应大于或等于0.40，否则试验不成立，需重新试验。

注意：若酶标仪读数前没有以空白孔调零，则上述所有测得的结果均应减去空白孔A值再做判定。

【参考值（参考范围）】

未感染也未免疫猪乙型脑炎疫苗的健康猪群为阴性，A值小于0.2。仔猪因其体内含有有母源抗体，其测定A值可能大于临界值。

【检验结果的解释】

1．严重溶血、血清中纤维蛋白分离不充分、含红血球、有沉淀物、长菌的样本可能导致假阳性。

2．因个体差异或免疫时间长短等因素可能会出现个别猪只免疫疫苗后检测结果为阴性。

3．阳性结果用于感染猪的血清学诊断以及流行病学调查时需结合其他方法和临床资料进行。

【产品性能指标】

1．特异性以本品检测30份阴性参比血清不出假阳性。

2．敏感性以本品检测30份阳性参比血清不出现阴性。

3．精密性用精密性参比品测定，CV（%）不高于15%（n=10）。

4．稳定性试剂盒在2℃～8℃放置6个月或37℃放置3天，检定结果达到以上1-3标准。

【注意事项】

1．本试剂盒仅用于体外诊断。

2．本试剂盒应按含有传染性材料对待，操作时需戴手套穿工作衣。

3．实验废弃物应经121℃高压蒸汽灭菌30分钟，或用5.0g/L次氯酸钠等消毒剂处理30分钟后废弃。

4．微孔板从冷藏环境中取出时应在室温中平衡至潮气干尽后方可拆开，未用完的微孔板须放回有干燥剂的铝箔袋并密封4℃保存。未用完的液体试剂应盖好瓶盖，与其它配套组份放入试剂盒中于2℃-8℃避光保存。

5．若20倍浓缩洗涤液出现结晶，属正常现象，放置37℃至溶解后即可。

6．应用微量移液器加入样本及试剂，并经常校对其准确性。

7．加洗涤液时应做到满而不溢，防止孔口有游离酶不能洗净或各孔间的交叉污染。

8．终止液有腐蚀性，若溅到皮肤或衣物上应立即用大量清水冲洗干净。

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