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ELISA竞争抑制法普遍存在的操作问题

时间：2012/3/11阅读：1102

两对半使用ELISA方法，其中HBsAg、HBsAb、HBeAg使用双抗原/抗体夹心法检测，而HBcAb、HBeAb使用竞争抑制法检测。

而竞争抑制法的原理：酶标抗体与样本抗体在同样的体系中，与固相抗原竞争结合是等比关系。原论上讲，应该先将样本与酶标抗体先行混匀，然后加入反应也进行。但实际工作中并非如此，都是分开加入反应孔。这样会造成先加入的先结合，与后加入者并不是公平的关系，因而也不符合等比原则。特别是在放置时间长，且温度高的情况下，对结果有很大的影响。

第二军医大学长海医院对此造成的影响进行了研究。将阴性标本94份并用生理盐水进行1：30稀释，在加入标本后按下表时间放置后再加入酶标抗体，然后检测结果如下：

放置时间（min）	阴性标本数	临界值－标本A450nm值			假阳性率（%）
放置时间（min）	阴性标本数	<0.3	0.3~0.7	>0.7	假阳性率（%）
0	75	10	3	6	0
2	68	13	7	6	7.4
5	65	15	8	6	10.6
10	56	16	12	10	20.2
20	38	18	17	21	39.3
30	21	12	18	43	57.4

从上表可以看出，如果同时加入标本与酶标抗体，没出现假阳性现象。2分钟后再加入酶标抗体，由于标本比酶标抗体先结合了两分钟，因此出现了7.4%的假阳性。30分钟后再加，假阳性高达57.4%。因此建议竞争抑制法的项目，加十个样本后立即加酶标抗体，这样对检测结果没有影响。

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