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苏丹红ELISA试剂盒

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产品型号CFC015D

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更新时间：2018-04-16 04:19:50浏览次数：153次

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苏州艾瑞德生物科技有限公司

经营模式：生产厂家

商铺产品：66条

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产品简介

欢迎访问公司：http://www.ardbio.cn 苏州艾瑞德生物科技有限公司是一家*的生物科研产品与合同供应商，是国内专注于食品安全检测、动物疫病检测以及相关领域的高科技生产型企业。*以来，产品质量稳定*，并与国内的检验检疫管理部门及*科研院所等机构密切合作，研究开发*的检测技术及产品。可面对大型检验检测机构和企业自有实验室提供全系列产品和有效的。

详细介绍

一、原理
本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在微孔条上预包被偶联抗原，样本中的苏丹红和微孔条上预包被的偶联抗原竞争苏丹红抗体，加入酶标记物后，用TMB底物显色，样本吸光值与其所含残留物苏丹红的含量成负相关，与标准曲线比较可得出相应苏丹红的含量。

二、试剂盒技术指标
试剂盒灵敏度：         0.4ppb
样本定量检测下限
水基质(番茄酱、坛坛乡)   0.4ppb
油基质(辣椒油，辣椒酱)   0.4ppb
粉末状(辣椒粉)          1.0ppb
交叉反应率
苏丹1号 ……………………………………………… *
苏丹2号 ……………………………………………… ＜1%
苏丹4号 ……………………………………………… ＜1%
对位红 ………………………………………………… 120%
样本回收率
水基质 ……………………………………………… 75±10%
油基质 ……………………………………………… 50±10%
粉末状 ……………………………………………… 65±10%

三、试剂盒组成
1、微量测试孔：96T
2、标准品液：(1ml/瓶) 0ppb、0.4ppb、3.2ppb、6.4ppb、12.8ppb、25.6ppb
3、酶标记物          12ml
4、抗体工作液        7ml
5、底物缓冲液破      7ml
6、底物液            7ml
7、终止液            7ml
8、 20倍浓缩洗涤液   50ml
9、1mg/ml标准品液：(0.2ml)

四、样本处理
取1g样品(辣椒面、辣椒油、辣椒酱、番茄酱)，加入3 mL丙酮溶液，超声震荡20 min，涡旋混合0.5 min，静置10 min， 3000 r/min离心分离10 min，取上清100 μL用PBST稀释10倍至1 mL，取50 μL进行ELISA测定。

五、操作步骤
1. 将试剂盒从冷藏环境中取出，置于室温(20～26℃)下平衡30min以上，将需用的条板固定于支架，按顺序编号；
2. 洗液配制：将50 mL浓缩洗涤液(20倍浓缩)用去离子水稀释至1000 mL备用。(或按需量稀释)
3. 标准品的配制：先将试剂盒中的1 mg/mL苏丹红标准品用洗液稀释1000倍，变成1000 ng/mL，再用洗液将1000 ng/mL的标准品分别稀释成0.4 ng/mL， 3.2 ng/mL，6.4 ng/mL，12.8 ng/mL，25.6 ng/mL。(现配现用)
4. 在标准品孔中加入50 μL标准品，样品孔加入50 μL待测样品，然后每孔加入50 μL抗体(加入标品和样品时无时间差的影响)，轻拍混匀，37℃下孵育30min；
5. 倒出孔中的液体，以试剂盒浓缩洗液稀释20倍后作为洗液，用洗板机洗涤4～6遍；没有洗板机的用户可用300 μL洗液充入各孔中，静置20 s，倒出孔中的液体，将微孔架倒置，在吸水纸上连续拍打3次以上，以保证*除去孔中的液体，重复操作4～6遍；
6. 每孔加入酶标记物100 μL，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置37℃ 环境中反应20 min ，取出重复洗板步骤。
7. 显色：每孔加入底物缓冲液50 μL，再加底物液50 μL．轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后，置37℃ 环境中反应10 min。
8. 测定：每孔加入终止液50 μL，轻轻振荡混匀．设定酶标仪于450 nm处(建议用双波长450/630 nm 检测，在20 min内读完数据)，测定每孔OD 值，根据标准曲线计算样品浓度。

标准样品配制方法：
(1)准备5个1 mL瓶子，其中一个加入1000 μL洗液，一个加入700 μL洗液，其余的分别加入500 μL洗液。
(2)在1000 μL洗液瓶子中先吸出25.6 μL的洗液，然后加入25.6 μL的1000 ng/mL标准品，混匀，使其浓度为25.6 ng/mL，作好记号；
(3)再从25.6 ng/mL的瓶子中吸出500 μL加入其中一个500 μL洗液的瓶子中，使其浓度为12.8 ng/mL，混匀，作好记号；
(4)再从12.8 ng/mL的瓶子中吸出500 μL加入其中一个500 μL洗液的瓶子中，使其浓度为6.4 ng/mL，混匀，作好记号；
(5)再从6.4 ng/mL的瓶子中吸出500 μL加入其中一个500 μL洗液的瓶子中，使其浓度为3.2 ng/mL，混匀，作好记号；
(6)再从3.2 ng/mL的瓶子中吸出100 μL加入其中一个700 μL洗液的瓶子中，使其浓度为0.4 ng/mL，混匀，作好记号。 (加样前应将标准品充分混匀，配好后在半小时内使用)

七、结果判定
以标准品百分吸光率为纵坐标，以苏丹红标准品浓度(ng/ml)的半对数为横坐标，绘制标准曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓度，乘以其对应的稀释倍数即为样本中苏丹红实际浓度。

八、注意事项
1．室温低于20℃或试剂及样本没有回到室温(20-25℃)会导致所有标准的OD值偏低。
2．洗板拍干后应立即进行下一步操作。
3．混合要均匀，洗板要*，否则会出现重复性不好的现象。
4．反应终止液为2M ，避免接触皮肤。
5．将不用的微孔板放进自封袋重新密封; 标准物质和无色的发色剂对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。
6．不要使用过了有效日期的试剂盒，不要使用不同批号试剂盒中的试剂。
7．显色液若有任何颜色表明变质，应当弃之，0标准的吸光度值小于0.6时，表示试剂可能变质。
8．该试剂盒*反应温度为25 ℃，温度过高或过低将导致检测吸光度值和灵敏度发生变化。

九、储藏条件和保质期
储藏条件：试剂盒于2-8℃保存，不要冷冻。
保质期：该产品有效期为1年，生产日期见包装盒。