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苏州艾瑞德生物科技有限公司
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莱克多巴胺属于β-兴奋剂类药物，可提高胴体瘦肉率，曾被广泛添加于饲料中。人食用了含莱克多巴胺残留的动物性食品，会出现肌肉震颤、心悸、过敏、头痛目眩、恶心、呕吐、发烧、颤栗等症状，世界各国已明文禁止其使用。常规仪器检测方法不能满足实际生产中大批量检测的需求。莱克多巴胺快速检测试剂盒具有方便、快速、灵敏等特点，适用于大批量样品快速检测。
【测定原理】
本试剂盒采用间接竞争ELISA法检测尿样和组织等样本中的莱克多巴胺，在微孔条上预包被偶联抗原，利用抗原与抗体的特异性免疫化学反应的原理来进行，样本中的克伦特罗和微孔条上预包被偶联抗原竞争标记有辣根过氧化酶的抗莱克多巴胺抗体，通过洗涤后，用TMB底物显色，样品中的莱克多巴胺含量与样品的吸光度值呈反比，与标准曲线比较即可得出莱克多巴胺含量。
【试剂盒技术指标】
规 格：96孔/盒
灵 敏 度： 0.1ppb
检测时间： 45min
样本检测下限：
尿 样 ………………………………… 0.1ppb
组 织（处理法一）…………………… 0.4ppb
肉样本（处理法二）…………………… 0.1ppb
肝样本（处理法二）…………………… 0.2ppb
饲 料 …… …………………………… 1ppb
交叉反应率：
莱克多巴胺（Ractopamine）……………… *
克伦特罗（Clenbuterol）………………… <0.1%
*（Salbutamol ）………………… <0.1%
多巴酚丁胺（dobutamine）……………… <0.1%
样本回收率：
尿 样 ……………………… 95%±10%
组 织 ……………………… 85%±15%
饲 料 ……………………… 85%±15%
【试剂盒组成】
1、 微量测试孔：1×96孔板（12条×8孔）
2、 （Clenbuterol标准溶液X6瓶：（1ml/瓶）0ppb、0.1ppb、0.3ppb、0.9ppb、2.7ppb、8.1ppb
3、 酶标记抗体工作液 10ml………………绿色帽
4、 底物A液 7ml ……………………白色帽
5、 底物B液 7ml ……………………黑色帽
6、 终 止 液 7ml ……………………黄色帽
7、 20X浓缩洗涤液40 ml ………………透明帽
酶标免疫分析程序
测定前应须知：
1、 使用之前将所有试剂和需用板条的温度回升至室温（20-25℃）。
2、 使用之后立即将所有试剂放回2-8℃。
3、 在ELISA分析中的再现性，很大程度上取决于洗板的*性，正确的洗板操作是ELISA测定程序中的要点。
4、 在所有恒温孵育过程中，避免光线照射，用盖板膜封住微孔板。
操作步骤：
1、 将所需试剂从4℃冷藏环境中取出，置于室温（20-25℃）平衡30min以上, 注意每种液体试剂使用前均须摇匀。
2、 取出需要数量的微孔板及框架，将不用的微孔板放入自封袋，保存于2-8℃不要冷冻。
3、 编号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。
4、 加标准品/样本20µl/孔到各自的微孔中，然后加酶标记抗体80µl/孔，用盖板膜封板，轻轻振荡混匀，25℃环境中反应30min。
5、 小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，用去离子水250µl/孔充分洗涤4-5次，每次间隔15-30秒，用吸水纸拍干（拍干后未被清除的气泡可用干净的枪头刺破）。
6、 显色：每孔加入底物A液50µl，再加底物B液50µl，轻轻振荡混匀25℃环境避光显色15min。
7、 测定：每孔加入终止液50µl，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于450nm处 （建议用双波长450/630nm，检测在5min内读完数据）测定每孔OD值。
【结果判定】
结果判定有两种方法，粗略判定可用第1种方法，定量判定用第2种方法。注意样本吸光值与其所含莱克多巴胺量成负相关。
1、用样本的平均吸光度值与标准值比较即可得出其浓度范围（ng/ml）。例如样本1的吸光度值为0.311，样本2的吸光度值为0.715，标准品吸光度值分别是： 0ppb为1.642；0.1ppb为1.200；0.3ppb为0.780；0.9ppb为0.454； 2.7ppb为0.236；8.1ppb为0.142。则样本1的浓度范围是0.9ppb-2.7ppb，样本2的浓度范围是0.3ppb-0.9ppb。乘以其对应的稀释倍数即为样本中莱克多巴胺的实际浓度。
2、定量分析
（1）百分吸光率的计算，标准品或样本的百分吸光率等于标准品或样本的百分吸光度值的平均值（双孔）除以*个标准（0标准）的吸光度值，再乘以*，即
百分吸光度值（%）＝ B ×*
B—标准溶液或样本溶液的平均吸光度值
B0—0ng/ml标准溶液的平均吸光度值
（2）标准曲线的绘制与计算
以标准品百分吸光率为纵坐标，以莱克多巴胺标准品浓度（ng/ml）的半对数为横坐标，绘制标准曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓度，乘以其对应的稀释倍数即为样本中莱克多巴胺的实际浓度。
若利用试剂盒专业分析软件进行计算，更便于大量样本的准确、快速分析。（索取）
3、标准曲线：
B/B0 （%）
Ract（ppb） [µg/kg]
图1：莱克多巴胺检测试剂盒的回归曲线
4、再现性：
%CV
Ract （ppb） [µg/kg]
图2：莱克多巴胺检测试剂盒的精密度
由多个不同的实验结果确定了精密度，图2显示出莱克多巴胺检测试剂盒的精密度情况，获得的标准吸收值的变异系数（%CV）对相应莱克多巴胺浓度作曲线，可以看到在全部范围内变异系数如此之低，可以得到很好的再现性。
【注意事项】
1、 使用前将所有试剂温度回升至室温20-25℃。试剂及标本没有回到室温（20-25℃）会导致所有标准的OD值偏低。
2、 在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会伴随着出现标准曲线不成线性，重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。
3、 混合要均匀，否则会出现重复性不好的现象。
4、 反应终止液为2M硫酸，避免接触皮肤。
5、 不要使用过了有效日期的试剂盒，稀释或搀杂使用会引起灵敏度、OD值的变化。不要交换使用不同批号的盒中试剂。
6、 不用的微孔板放进自封袋密封；标准物质和无色的发色剂对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。
7、 显色液若有任何颜色表明变质，应当弃之。0标准的吸光度值小于0.5个单位（A450nm<0.5 ）时，表示试剂可能变质。
8、 该试剂盒*反应温度为25℃，温度过高或过低将导致检测吸光度值和灵敏度发生变化。
【储存】
原包装应储存于2～8℃保鲜冷藏，切勿冷冻。
【有效期】
有效期12个月;生产日期、有效期、生产批号见外包装。
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