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恒温消解在蛋白质测定中的应用
阅读：9046发布时间：2009-7-16
恒温消解在蛋白质测定中的应用
苏敬武 丛伟红 车燕妮
（威海市卫生防疫站 威海 264200）
本文摘自《中国食品卫生杂志》2001年第13卷第4期
凯氏定氮法测定蛋白质的含量，是zui常用的蛋白质测定方法，但样品的消解费事费时，一般一台电炉一天zui多消化两个样品。我们采用型恒温消解仪进行蛋白质消解，4~6小时可同时消化16个样品。
1 实验方法
1.1 仪器及试剂
1.1.1 仪器
DTD-40型恒温消解仪（北京中卫食品卫生科技公司出品）；平底硬质玻璃消化管；定氮蒸馏装置。
1.1.2 试剂
硫酸铜；硫酸钾；硫酸；过氧化氢；20g/L硼砂溶液；混合指示剂：2份1g/L甲基红乙醇溶液与5份2g/L溴甲酚绿乙醇溶液临用时混合；400g/LNaOH溶液；C（HCl）=0.02000mol/L的盐酸标准滴定溶液。
1.2 实验操作
1.2.1 样品消解
称0.2-2.0g固体样品或5-10g液体样品于平底玻璃消化管中，加0.2g硫酸铜，3g硫酸钾及20ml硫酸，稍摇匀后于管口放一小漏斗，置于恒温消解仪中，300℃左右，小心加热，一般2h内，管内容物可全部炭化，泡沫*停止。将温度降至240℃左右，分几次向管内共加10ml过氧化氢，提高温度至390℃左右，继续消化，至液体呈蓝绿色澄清透明后，再继续加热30min，放冷后，定容100ml，混匀备用。取与处理样品相同的硫酸铜、硫酸钾、硫酸、过氧化氢按同一方法做试剂空白实验。
本方法全部消化过程约需4-6h，一次zui多可消化16个样品。
同时使用普通电炉进行蛋白质消解，进行比较实验。
1.2.2 定氮测定
按国家标准[1]中GB 5009.5-85食品中蛋白质的测定方法（4.3）微量定氮法进行操作。
2 结果及讨论
2.1 样品的用量：根据不同的蛋白质含量，取0.2g-2.0g样品，置消化管内进行消解，在300℃初始消解无外溢现象。样品先加酸放置过夜，可加快消解速度。开始消解时，由于消解温度恒定，消解管整体受热均匀，一般泡沫不能溢出管外，较直接电炉消解容易控制。
2.2 消解温度：初始消解时温度不可过低，过低造成消化时间延长。实验证明初始消解温度300℃为宜。只要消解管内无泡沫产生，应及时把温度提高到390℃左右，以加快消解速度。
2.3 不同消解方法蛋白质测定结果的比较：对保健品、乳及乳制品等15份样品，用凯氏烧瓶和恒温消解仪消化样品，分别测定蛋白质含量，结果比较如下：
表1 两种消解方法蛋白质测定结果比较（%）
| 样品号 | 普通电炉消解法 | 恒温消解仪法 |
| 1 | 16.3 | 17.0 |
| 2 | 30.8 | 33.8 |
| 3 | 23.0 | 22.2 |
| 4 | 3.25 | 3.33 |
| 5 | 3.38 | 3.59 |
| 6 | 1.44 | 1.27 |
| 7 | 0.510 | 0.555 |
| 8 | 0.490 | 0.477 |
| 9 | 0.842 | 0.891 |
| 10 | 2.95 | 3.01 |
| 11 | 0.576 | 0.627 |
| 12 | 0.574 | 0.579 |
| 13 | 0.572 | 0.630 |
| 14 | 0.319 | 0.327 |
| 15 | 0.319 | 0.337 |
T=1.033; T[14,0.05）=2.145，P>0.05
两种方法消化样品，蛋白质含量测得结果经统计学处理表明无显著差异。
参 考 文 献
1 GB/T 5009-1996 食品卫生检验方法（理化部分）
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