实体组织单细胞悬液的制备

1、酶消化法

⑴ 选取的组织立即放入预冷的组织培养液或PBS中，清洗血迹及其它污染物。去除组织块中的块死成分、纤维、脂肪及血管（专门制备相关细胞时除外）。

⑵ 用眼科剪将组织块剪成1mm³左右小块，放在预冷的组织培养液或PBS中并进行漂洗，洗去剪碎的细胞碎片。

⑶ 加入适量酶消化液，37℃恒温水浴消化20～30min，期间进行间断振荡或吹打细胞。

⑷ 用冷培养液或PBS终止消化，用300目尼龙网过滤除去组织团块，收集滤过的细胞，500g离心10min后去上清，并用PBS洗1～2次。细胞计数总数不少于10⁶个细胞。

⑸ 如果下一步做DNA含量分析，则将细胞悬液用70%预冷乙醇4℃固定。如果做免疫荧光测定，则不用乙醇固定，须尽快染色后上机检测。

2、机械法（网搓法）

⑴ 前处理同酶消化法⑴、⑵步。

⑵ 将300目尼龙网扎在小烧杯上，将剪碎的组织放在网上，以*或刮刀轻搓组织块，边搓边以PBS冲洗，直至将组织搓完。

⑶ 收集细胞悬液，500g离心10min后去上清，并用PBS洗1～2次。细胞计数总数不少于10⁶个细胞。

⑷ 同酶消化法⑸步。