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酶在保存中的注意事项
酶的保存条件的选择必须有利于维护酶天然结构的稳定性,保存酶应注意以下四点:
温度
酶的保存温度一般在0℃-4℃,但有些酶在低温下反而容易失活,因为在低温下亚基间的疏水作用减弱会引起酶的解离。此外,零度以下溶质的冰晶化还可引起盐分浓缩,导致溶液的PH值发生改变,从而可能引起酶巯基间连接成为二巯键,损坏酶的活性中心,并使酶变性。
缓冲液
大多数酶在特定的PH值范围内稳定,偏离了这个范围便会失活,这个范围因酶而异,如*在酸性条件下稳定,而固氮酶则在中性偏碱性条件下稳定。
氧防护
由于巯基等酶分子基团或Fe-S中心等容易为分子氧所氧化,故这类酶应加巯基保护剂或在氩气或氮气中保存。
蛋白质的浓度及纯度
一般来说,酶的浓度越高,酶越稳定,制备成晶体或干粉更有利于保存。此外,还可通过加入酶的各种稳定剂如底物、辅酶、无机离子等加强酶稳定性,延长酶的保存时间。
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