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肌动蛋白α抗体说明,Actin α抗体,α-SMA抗体

时间:2013-2-25阅读:667
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肌动蛋白α抗体说明,Actin α抗体,α-SMA抗体

禽血清IgG的分离与提纯(Na2SO4法)
1.试剂
⑴ 5%葡聚糖硫酸盐
⑵ 0.02Mol/L MnCl2溶液
⑶ *
⑷ pH8.2硼酸盐缓冲液
⑸ 0.06Mol/L pH7.4PB液
2.操作方法
⑴ 取禽血清10ml加5%葡聚糖硫酸盐液,0.40ml和0.025Mol/L MnCl21.00ml充分混合,静置,然后离心去沉淀,此步目的是为了去掉脂类物质。
⑵ 于上清液中加*使每毫升血清含0.18g,缓慢加入,混匀,静置30min,3 000r/min离心去上清。
⑶ 以pH8.2硼酸盐缓冲液将沉淀稀释至原血清的一半再加硫酸钠使成0.16g/ml,同上法离心去上清。
⑷ 重复步骤⑶,加Na2SO4,使成0.14g/ml。
⑸ 以少量硼酸盐缓冲液溶解沉淀,然后装透析袋除盐48h。
⑹ 过SephadexG200柱,收集*峰和第二峰。*峰是IgM,第二峰主要是IgG。
⑺ 如要进一步提纯,则用第二峰再过DEAE—纤维素柱,以0.06Mol/L pH7.4 PB液洗脱,洗脱下来的蛋白液即为IgG。肌动蛋白α抗体说明,Actin α抗体,α-SMA抗体

也可以按以下操作方法进行:
⑴ 以18%硫酸钠(W/V)提取一次,再以14%的硫酸钠提取一次。
⑵ 将粗提的免疫球蛋白以PBS溶解,按9%加入*,离心。再将上清按5%加入*,离心。将两沉淀溶解、混合,在常水中透析过夜,再在生理盐水中4℃透析,直至无SO42-为止。
⑶ 离心将上清液以pH8.0 0.20Mol/L PBS液平衡。
⑷ 过SephadexG200柱,以pH8.0 0.20Mol/L PBS液洗脱,收集洗脱液,取第二峰即为鸡IgG。

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