肾上腺髓质素受体抗体说明书，Anti-ADMR

禽IgA提取与纯化

（一）材料与试剂配制
1．禽胆汁
2．饱和硫酸铵溶液
3．0.01Mol/L pH7.4PBS液
4．0.10Mol/L pH6.4PBS液（0.30Mol/L NaCl）
5．        DEAE52-纤维素

操作方法
1．取冷藏的胆汁3Ⅹml，缓慢滴加Ⅹml饱和硫酸铵液，边加边搅拌，使成25％饱和硫酸铵液。4℃放置30min。
2．        3 000r/min离心30min，去沉淀。
3．        取上清，加饱和硫酸铵液，使成35％的饱和度，4℃放置30min。
4．        3 000r/min离心30min，弃上清。
5．        取沉淀，加0.85％NaCl液溶解，加饱和硫酸铵溶液，重复步骤3和4三次。
6．        将沉淀用0.85％NaCl液溶解，装入透析袋，以0.01Mol/L pH7.4PBS液透析。
7．        以0.01Mol/L pH7.4PBS液平衡，过DEAE52纤维柱（20×250mm）。
8．        取透析样品4ml（﹥20mg/ml蛋白浓度）加入层析柱。以0.01Mol/L pH7.4PBS液洗脱。
9．        再用0.10Mol/L pH6.4PBS液（NaCl浓度为0.30Mol/L）洗脱，收集洗脱液。
10．浓缩洗脱蛋白液至20mg/ml，分装，低温冰箱保存。

IgE的分离与提纯肾上腺髓质素受体抗体说明书，Anti-ADMR

（一）材料与试剂
1．血清
2．饱和硫酸铵溶液
3．洗脱液0.005Mol/L pH7.4PB液
0.025 Mol/L pH7.4PB液
0.01Mol/L pH7.4PBS液（0.14mol/L NaCl）
    4．DE52
5．SephadexG150

（二）操作方法
1．取血清倍比稀释后，加等量饱和（NH4）2SO4溶液，盐析。
2．离心取沉淀，溶于少量生理盐水中，透析、除盐。
3．过DE52柱，以0.005Mol/L pH7.4PB液洗脱，收集洗脱蛋白峰（IgG），弃去。
4．换以0.025Mol/L pH7.4 PB液洗脱，洗下的蛋白峰主要是IgE。
5．透析除盐。
6．过G150柱，以0.01Mol/L pH7.4PBS（0.14Mol/L NaCl）洗脱，收集洗脱液即为纯化的IgE。
7．        浓缩、鉴定。