高保留转录因子抗体相关信息

常用梯度洗脱法如下： 
（1）层析柱用0.01mol/L、pH7.2PB平衡，标记物上柱后，先用0.01mol/L、pH7.2PB洗脱，洗出无色或淡绿色液体，洗脱液量（根据床体积大小每梯度乘3），然后依下列各种离子强度洗脱液， 
分别洗脱和收集： 
0.01mol/L、pH7.2PBS（0.05mol/L NaCl）……洗脱部分1。 
0.01mol/L、pH7.2PBS（0.01mol/L NaCl）……洗脱部分2。 
0.01mol/L、pH7.2PBS（0.02mol/L NaCl）……洗脱部分3。 
将此三部分收集液（每管5ml）分别测定其F/P比值，0.05mol/L NaCl pH7.2PB洗脱液280nm光密度高峰管合并，浓缩保存备用。因这部分非特异性染色荧光zui少，是比较好的荧光抗体。其他两部分可以废弃。 
（2）柱上吸附的过度标记蛋白可继续增加NaCl的浓度至 
2.0mol/L洗脱完。 
经过DEAE-纤维素层析后的标记抗体，其抗体量一般约损失50%，因此有些要求不太高的抗体，如抗细菌荧光抗体，不一定要这样处理，可用染色效价测定的稀释法除去非特异性染色。 
（五）荧光抗体稀释法 
先测定荧光抗体特异性染色与非特异性染色的效价，若二者效价相差较大，则可将荧光抗体稀释至一临界浓度，使特异性染色呈阳性，而使非特异性染色保持阴性，稀释方法和染色效价测定方法相同。 
（六）纯化抗原法 
用各种方法提纯单一成分的抗原是产生单价特异性抗体的zui主要条件。近代免疫化学技术（免疫吸收法）和柱层析法等提供了很大的可能性，可参考有关专著。 
（七）纯化抗体法---免疫吸收法 
例如抗IgA血清的纯化方法---免疫吸收法。如分泌型IgA（ SIgA）抗原纯度不高，所制的抗血清常与IgG呈交叉反应，为此需要吸收，常采用纯化的人IgG戊二醛聚合物加以吸收纯化。方法如下：  高保留转录因子抗体相关信息 
1．人IgG聚合物的制备　　在5ml含40mg/ml人IgG的0.1mol/L pH7.0磷酸缓冲溶液中，加入2.5%戊二醛溶液1ml，边加边搅，5min即出现混浊，逐现大块胶块，放置30min后，用研钵将凝胶磨细，继用1.0mol/L pH7.0磷酸缓冲溶液反复洗涤3次，末次加蒸馏水至20ml，即为人IgG聚合物悬液。 
2．免疫吸收法　　将待吸收的抗SIgG血清加入待量IgG聚合物悬液，置室温搅拌60min,离心沉淀，上清液即稀释1倍的纯化抗SIgA血清。如用IgG聚合物作少量分次吸收，其效果更好。 
（八）伊文氏蓝（Evans blue）衬染法 
用0.01%伊文氏蓝的0.01mol/L pH7.2PBS稀释荧光抗体，可将背景细胞和组织染色，呈红色荧光，与特异性黄绿色荧光形成鲜明的对比，减少了非特异性荧光，宜作常规应用。伊文氏蓝一般先配成1%溶液，保存于4℃，用前再稀释至0.01%用以 
和然释荧光抗体。 
此外，还可以用*消化组织切片或用10%牛血清蛋白封闭法等消除非特异性染色，提高特异性染色。