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污染的可能原因:可能原因很多比如配液消毒问题、操作问题、环境问题等等
关于培养基的无菌状况,取培养基至培养瓶中(不加细胞),37度试培养一段时间后观察。如果没有细菌生长 就是操作的问题。
也可以在培养基中事先加入双抗(*和氨苄*)。但双抗有时会影响细胞的状态,所以在做转染、检测细胞某项指标前一定要撤去双抗,以避免影响实验结果。
人纤维肉瘤当重要的培养污染时,研究者可能试图消除或控制污染。首先,确定污染物是细菌、真菌、支原体或酵母,把污染细胞与其它细胞系隔离开,用实验室消毒剂消毒培养器皿和超净台,检查HEPA过滤器。
高浓度的抗生素和抗霉菌素可能对一些细胞系有毒性,因而,做剂量反应实验确定抗生素和抗霉菌素产生毒性的剂量水平。这点在使用抗生素如*和抗霉菌素如泰乐菌素时尤其重要。下面是*的确定毒性水平和消除培养污染的实验步骤。
1 在无抗生素的培养基中消化、计数和稀释细胞,稀释到常规细胞传代的浓度。
2 分散细胞悬液到多孔培养板中,或几个小培养瓶中。在一个浓度梯度范围内,把选择抗生素加入到每一个孔中。例如,**下列浓度,0.25,0.50,1.0,2.0,4.0,8.0 mg/ml。
3 每天观测细胞毒性指标,如脱落,出现空泡,汇合度下降和变圆。
4 确定抗生素毒性水平后,使用低于毒性浓度2-3倍浓度的抗生素的培养液培养细胞2-3代。
5 在无抗生素的培养基中培养细胞一代。
6 重复步骤4。
7 在无抗生素的培养基中培养4-6代,确定污染是否以已被消除。
小鼠胚胎肝细胞 | BNL CL.2 | 人肺腺癌细胞 | CaLu-3 |
大鼠肝细胞 | BRL | 人宫颈癌 | CASKI, |
大鼠肝细胞 | BRL 3A | 人结肠癌 | Colo205 |
人乳腺导管癌细胞 | BT-474 [BT474] | 人结肠癌 | Colo320DM |
人乳腺管癌细胞 | BT-549 | 人髓母细胞瘤 | D341 Med |
人原位胰腺腺癌细胞 | BxPC-3 | 人B淋巴细胞瘤 | Daudi |
小鼠乳腺肿瘤细胞 | C127 | 人前列腺癌细胞 | DU145 |
小鼠成肌细胞 | C2C12 | 人肾癌Wilms | G-401 |
人子宫颈癌 | C-33 A | 人肺腺癌细胞 | GLC-82 |
小鼠胚胎成纤维细胞 | C3H/10T1/2, Clone 8 | 人结直肠癌 | HCT116 |
大鼠胶质瘤细胞 | C6 | 人结肠腺癌 | HCT-8 |
人宫颈癌肠转移细胞 | Ca Ski | 人子宫内膜癌细胞 | HEC-1B |
人结直肠腺癌细胞 | Caco-2 | 人宫颈癌细胞 | Hela |
人肾透明细胞癌皮肤转移细胞 | Caki-1 | 人肝癌细胞 | Hep G2 |
人肺癌细胞 | Calu-1 | 人喉癌细胞 | Hep-2 |
人肺腺癌 (胸水) | Calu-3 | 人白血病细胞 | HL-60 |
人退行性癌细胞 | Calu-6 | 人骨肉瘤细胞 | HOS |
大鼠肝癌细胞 | CBRH-7919 | HT-1080 | |
人乳腺浸润性导管癌旁皮肤细胞 | CCD-1095Sk | 人结肠腺癌细胞 | HT-29 |
人急性淋巴细胞白血病T淋巴细胞 | CCRF-CEM [CCRF CEM] | 人十二脂肠腺癌 | HuTu-80 |
人急性淋巴细胞白血病细胞 | CEM/C1 | 人绒癌细胞 | JEG-3 |
人胰腺癌细胞 | CFPAC-1 | 人绒癌细胞VP16耐药株 | JEG-3/VP16 |
人EB病毒转化的B细胞 | CGM1 | 人绒癌细胞VP16耐药株IL-2转染 | JEG-3/VP16-IL-2 |
人张氏肝细胞 | Chang liver | 人绒癌细胞VP16耐药株TNFa转染 | JEG-3/VP16-TNFa |
仓鼠肺细胞 | CHL | 人T淋巴瘤细胞转基因细胞 | Jurkat D,E |
仓鼠卵巢细胞,二氢*还原酶缺陷 | CHO/dhFr- | 人T细胞淋巴瘤 | Jurkat E6-1 |
仓鼠卵巢细胞亚株 | CHO-K1 | 人T淋巴瘤细胞亚系 | Jurkat77 |
仓鼠卵巢细胞 | CHO | 人红白血病细胞 | K562 |
人鼻咽癌细胞 | CNE | 人口腔上皮癌 | KB |
人结肠癌细胞 | COLO 205 | 人前列腺癌 | LNCaP |
人结直肠腺癌细胞 | COLO 320DM | 人结肠癌 | LoVo |
人结肠腺癌细胞 | COLO-320 | 人巨细胞白血病细胞 | M-O7e |
非洲绿猴SV40转化的肾细胞 | COS-1 | 人神经母细胞瘤 | M17 |
非洲绿猴SV40转化的肾细胞 | COS-7 | 待查 | M2 |
猫肾细胞 | CRFK | 人乳腺癌细胞 | MCF7 |
小鼠结肠癌细胞 | CT26.WT | 人乳腺癌细胞 | MCF7B |
中国仓鼠卵巢细胞 | CTLA4 Ig-24 | 人乳腺癌细胞 | MDA-MB-157 |
小鼠T细胞 | CTLL-2 | 人乳腺癌细胞 | MDA-MB-231 |
非洲绿猴肾细胞 | CV-1 [Part of the Wistar Special Collection] | 人乳腺癌细胞 | MDA-MB-435s |
人结肠腺癌细胞 | CW-2 | 人乳腺癌细胞 | MDA-MB-453 |
人巨核细胞白血病细胞 | Dami | 人骨肉瘤细胞 | MG-63 |
人Burkitt's淋巴瘤细胞 | Daudi | 人淋巴细胞白血病细胞 | MOLT-4 |
狗肾恶性组织细胞增生症细胞 | DH82 | 人非小细胞肺腺癌 | NCI-H157 |
人结直肠腺癌上皮细胞 | DLD-1 | 人小细胞肺癌 | NCI-H209 |
鸡淋巴瘤细胞 | DT40 | 人小细胞肺癌 | NCI-H446 |
人前列腺癌细胞 | DU 145 | 人恶性多发性畸胎瘤细胞 | NTERA-2 |
人脐静脉细胞融合细胞 | EA.hy926 | 人卵巢畸胎瘤细胞 | PA-1 |
牛胚气管细胞 | EBTr (NBL-4) | 人胰腺癌细胞 | PANC-1 |
人食管癌细胞 | Eca-109 | 人前列腺癌细胞 | PC-3 |
小鼠淋巴瘤细胞 | EL4 | 黑人Burkitt淋巴瘤 | RAJI |
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HCC1187 BL CRL-2323 人 外周血, B 淋巴母细胞; EBV 转化 淋巴母细胞 簇群悬浮 |
HCC1395 CRL-2324 人 乳腺; 原发 导管 癌 上皮细胞 贴壁 |
HCC1395 BL CRL-2325 人 外周血, B 淋巴母细胞; EBV 转化 淋巴母细胞 簇群悬浮 |
HCC1419 CRL-2326 人 乳腺; 原发 导管 癌 上皮细胞 贴壁, 不均匀patchy |
HCC1428 CRL-2327 人 肋膜积腋 (转移); 腺癌 (乳腺 原发) 上皮细胞 贴壁 |
HCC1428 BL CRL-2328 人 外周血, B 淋巴母细胞; EBV 转化 淋巴母细胞 簇群悬浮 |
HCC1500 CRL-2329 人 乳腺; 原发 导管 癌 上皮细胞 贴壁 |
HCC1569 CRL-2330 人 乳腺; 原发化生性癌 上皮细胞 贴壁 |
HCC1599 CRL-2331 人 乳腺; 原发 导管癌 上皮细胞 簇群悬浮 |
HCC1599 BL CRL-2332 人 外周血, B 淋巴母细胞; EBV 转化 淋巴母细胞 簇群悬浮 |
HCC1739 BL CRL-2334 人 外周血, B 淋巴母细胞; EBV 转化 淋巴母细胞 簇群悬浮 |
HCC1806 CRL-2335 人 乳腺; 原发棘状鳞细胞癌 上皮细胞 贴壁 |
HCC1937 CRL-2336 人 乳腺; 原发 导管 癌 上皮细胞 贴壁 |
HCC1937 BL CRL-2337 人 外周血, B 淋巴母细胞; EBV 转化 淋巴母细胞 簇群悬浮 |
HCC1954 CRL-2338 人 乳腺; 导管 癌 上皮细胞 贴壁 |
HCC1954 BL CRL-2339 人 外周血, B 淋巴母细胞; EBV 转化 淋巴母细胞 簇群悬浮 |
HCC202 CRL-2316 人 乳腺; 原发 导管 癌 上皮细胞 混和 |
HCC2157 CRL-2340 人 乳腺; 原发 导管 癌 上皮细胞 悬浮 |
HCC2157 BL CRL-2341 人 外周血, B 淋巴母细胞; EBV 转化 淋巴母细胞 簇群悬浮 |
HCC2218 CRL-2343 人 乳腺; 原发 导管 癌 上皮细胞 簇群悬浮 |
HCC2218 BL CRL-2363 人 外周血, B 淋巴母细胞; EBV转化 淋巴母细胞 簇群悬浮 |
HCC2935 CRL-2869 人 肺, 肋膜积腋 上皮细胞 贴壁 |
HCC38 CRL-2314 人 乳腺; 原发导管癌 上皮细胞 贴壁 |
HCC38 BL CRL-2346 人 外周血, B 淋巴母细胞; EBV转化 淋巴母细胞 簇群悬浮 |
HCC4006 CRL-2871 人 肋膜积腋 (转移); 腺癌 (肺 原发) 上皮细胞 贴壁 |
HCC70 CRL-2315 人 乳腺; 原发 导管 癌 上皮细胞 贴壁 |
HCC827 CRL-2868 人 肺; 腺癌 上皮细胞 贴壁 |
hCD40L-M90 HB-12055? 小鼠/小鼠 杂交瘤 淋巴母细胞 悬浮 |
hCD40L-M91 HB-12056? 小鼠/小鼠 杂交瘤 淋巴母细胞 悬浮 |
HCE-2 CRL-11135? 人 眼 (角膜); AdV12-SV40 转化 上皮细胞 贴壁 |
HCN-1A CRL-10442? 人 脑, 皮层神经元 神经元 贴壁 |
HCN-2 CRL-10742? 人 脑, 皮层神经元 神经元 贴壁 |
HCT 116 CCL-247 人 结肠; 结肠 癌 上皮细胞 贴壁于饲养细胞 |
HCT-15 CCL-225 人 结肠; 结肠 腺癌 上皮细胞 贴壁 |
HCT-8 (HRT-18) CCL-244 人 结肠;回盲肠的结肠腺癌 上皮细胞 贴壁 |
HD168 HB-252 大鼠/小鼠 杂交瘤 淋巴母细胞 悬浮 |
HD2-4 HB-86 小鼠/小鼠 杂交瘤 淋巴母细胞 悬浮于饲养细胞 |
He We CRL-1338 人 皮肤; stiff 皮肤 综合症 成纤维细胞 贴壁 |
HEC-1-A HTB-112 人 子宫 (内膜); 腺癌 上皮细胞 贴壁 |
HEC-1-B HTB-113 人 子宫 (内膜); 腺癌 上皮细胞 贴壁 |
HECA-452 HB-11485? 大鼠/小鼠 杂交瘤 淋巴母细胞 悬浮 |
HEK001 CRL-2404 人 皮肤, 角质细胞; HPV-16 E6/E7 转化 上皮细胞 贴壁 |
HEL 299 CCL-137 人 肺, 胎儿 成纤维细胞 贴壁 |
HEL 92.1.7 TIB-180 人 骨髓, 成红血细胞; 红细胞白血病 淋巴母细胞 悬浮 |
HeLa CCL-2 人 颈; 腺癌 上皮细胞 贴壁 |
HeLa 229 CCL-2.1 人 颈; 腺癌 上皮细胞 贴壁 |
HeLa NR1 CRL-13011? 人 颈; 转染质粒 pSV2neoNR101的HeLa 细胞 上皮细胞 贴壁 |
HeLa S3 CCL-2.2 人 颈; 腺癌 上皮细胞 贴壁 |
HE-LU(Rifkin) CRL-7717* 人 肺, 胎儿 成纤维细胞 贴壁 |