考马斯亮兰法（Bradford 法）蛋白定量试剂盒说明书
考马斯亮兰法（Bradford 法），是目前灵敏度zui高的蛋白质测定法之一。考马斯亮兰
G-250 染料，在酸性溶液中与蛋白质结合，使染料的zui大吸收峰由 465nm 变为 595nm，溶
液的颜色也由棕黑色变为兰色。在 595nm 下测定的吸光度值 A595，与蛋白质浓度成正比。
包装：
考马斯亮兰溶液 300 毫升
蛋白标准（BSA ） 10 毫升（1mg/ml）
产品说明书 1 份
保存： 2℃-8 ℃ （BSA 蛋白标准-20℃）
实验步骤
1. 从冰箱取出考马斯亮兰溶液，平衡至室温并混匀；预热分光光度计 20 分钟或酶标仪。
2. 以分光光度计测;准备九支管，分别编号，按下列顺序加样。
编号 1 2 3 4 8 6 7 8 9
去离子水 µl 100 90 80 60 40 20 0
蛋白标准 µl 0 10 20 40 60 80 100
样品 µl 100 100
考马斯亮兰溶液 ml 3 3 3 3 3 3 3 3 3
混匀、，2~5 分钟后，以第 1 号试管为空白对照 595nm，测定各样品收值 A595，样品管 8、
9 取平均值
相当浓度 mg/ml 0 0.1 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0
注：样品和试剂比可以按比例放大或缩小。
微孔检测时，可以按比例缩小，但总体积不小于 100ul。
性能指标：
在 20～1200ug/ml 有着比较好的线性。当吸光度大于 0.8A 时，请把样本稀释后再做。
注意：
1.使用塑料或玻璃比色皿。如使用石英比色皿，使用后立即用少量 95%的乙醇荡洗，以
洗去染色用完后
可以乙醇反复清洗。塑料比色皿决不可用乙醇或丙酮长时间浸泡。
2.本方法标准曲线有轻微的非线性，因而不能用 Beer 定律进行计算，而只能用标准曲线来
测定
3.比色顺序从蛋白浓度低的管开始，中间不必清洗比色杯，以免影响结果。
4.疏水蛋白或粘蛋白，可能与染料发生沉淀，加入等体积 1N NaOH 可以消除。
5.如果知道样品的蛋白大体浓度，可以采用相近的 3 管做标准曲线。
6. 由于各种蛋白质中的*和芳香族氨基酸的含量不同，因此 Bradford 法用于不同蛋白
质测定时有较大的
偏差，在制作 标准曲线时通常选用 g—球蛋白为标准蛋白质，以减少这方面的偏差。
7. 有一些物质干扰此法的测定，主要的干扰物质有：去污剂、 Triton X-100 、十二烷基硫
酸钠（SDS ）和 0.1N
的 NaOH。（如同 0.1N 的酸干扰 Lowary 法一样）。
