上海金穗生物科技有限公司

免疫荧光技术

时间:2012-7-14阅读:580
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  免疫荧光技术(immunofluorescence,IF)是根据抗原-抗体反应的原理,先将已知的抗原或抗体标记上荧光素制成荧光标记物,再用这种荧光抗体(或抗原)作为分子探针检查细胞或组织内的相应抗原(或抗体)。

 
    常用的荧光素有异硫氰酸荧光素(FITC)和藻红蛋白(PE),前者发黄绿色荧光,后者发红色荧光。在细胞或组织中形成的抗原-抗体复合物上含有荧光素,利用荧光显微镜观察标本,荧光素受激发光的照射而发出明亮的荧光(黄绿色或橘红色),可以看见荧光所在的细胞或组织,从而确定抗原或抗体的性质、定位以及利用定量技术测定含量。由于荧光抗体具有安全、灵敏的特点,因此已广泛应用在免疫荧光检测领域。根据荧光素标记的方式不同,可分为直标荧光抗体和间标荧光抗体。
 
    近年来,随着荧光素和荧光检测技术的不断进步,荧光检测的灵敏度已经接近同位素检测的水平,直接标记的荧光抗体逐渐取代间接标记抗体。用荧光抗体示踪或检查相应抗原的方法称荧光抗体法;用已知的荧光抗原标记物示踪或检查相应抗体的方法称荧光抗原法。这两种方法总称免疫荧光技术,以荧光抗体法较为常用。用免疫荧光技术显示和检查细胞或组织内抗原物质或半抗原物质等方法称为免疫荧光细胞(或组织)化学技术。
 
    (1)直接荧光法  将荧光素标记在相应的抗体上,直接与相应抗原反应。其优点是方法简便、特异性高,非特异性荧光染色少;缺点是敏感性偏低,而且每检查一种抗原就需要制备一种荧光抗体。此法常用于细菌、病毒等病原微生物的快速鉴定。
 
    (2)间接荧光法  用一抗与标本中抗原结合,再用荧光素标记的二抗染色。该法优点是敏感度比直接法高,制备一种荧光素标记的二抗即可用于多种抗原的检查,但非特异性反应亦增加。染色程序分为两步,首先用未知未标记的抗体(待检标本)加到已知抗原标本上,在湿盒中37℃保温30min,使抗原抗体充分结合,然后洗涤,除去未结合的抗体;然后加上荧光标记的抗球蛋白抗体或抗IgG、IgM抗体。如果*步发生了抗原-抗体反应,标记的抗球蛋白抗体就会和已结合抗原的抗体进一步结合,从而可鉴定未知抗体。
 
    由于的特异性、快速性和在细胞和分子水平定位的敏感性与准确性,在动物检验检疫方面得到了广泛应用。

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