上海金穗生物科技有限公司

热稳定肠毒素(ST)的快速检测

时间:2012-12-1阅读:391
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        (1)ELISA检测ST  De.Mai等(1983)以过氧化物酶标记抗体,用抗原竞争间接法检测培养液中STl。定性检测时底物用5—氨基水杨酸,定量时用邻苯二胺。此法与乳鼠试验的相符率为96.7%,无假阳性。‘Thompson等(1984)建立了一种快速ELISA,经提高酶标记抗体浓度和竞争作用温度以及减少底物用量后,可使检测ST的时间缩短至lh。当用单抗时,该法对ST的检出限可达3pg/m1。Klipstein等以人工合成的ST(s)和ST(c)分别与猪IgG偶联后,并制成兔和羊抗ST血清,还以此建立了检测ST的双夹心ELISA。该法*抗体为兔抗ST血清,第二抗体用羊抗ST血清。如用纯化的抗ST(c)抗体作为*抗体、第二抗体,则对ST检测限为140pg/m1,比下降为乳鼠法的1/280,比粗制ST(s)抗体的检测敏感性增高2857倍,对50株人源ST阳性检出率为100%,无一假阳性。本法还可检测猪源ST。

 
    (2)放射免疫法  Giannetla等(1981)以改良的过氧化物酶法标记纯化STl,用抗原竞争法检测待检菌培养上清液中的STl,其检测限为50pg/m1的STl,特异性强,重复性亦好,不同时间测定的误差不大于5%,对STl和胃肠道多肽均无交叉反应。Frant等将猪源菌株431所产的ST与牛血清白蛋白或血蓝蛋白偶联后,制成兔抗ST血清,另以125I标记的该菌株ST作为检测标记物,通过待检ST对标记物的竞争抑制来测定样品中ST含量,其检测限达50pg每反应管,整个试验可在一天内完成。此法可检测猪、牛和人源的STl,对IrT及STl均无反应,且对STl的定量与乳鼠法所得的结果呈高度相关。
 
    (3)GMl—ELlSA  Svennerhotm等研制出抗STl的单抗,并以此建立了检测ST的GMl—ELISA。其主要步骤为将ST与CT的B亚单位(CT-B)偶联,再把偶联物结合到用GMl包被的酶标板上,将待检样品和ST标准样品分别稀释后,再各自与抗ST单抗在室温下作用1h,加入上述板孔中,再加入HRP标记的抗鼠免疫球蛋白,显色,测OD值。如待检菌株培养液滤液能≥50%抑制抗ST单抗与GMl—ST-CTB结合反应即判为阳性。通过与阳性反应的ST标准的稀释度做比较还可确定样品中ST的浓度。此法既能检测ST 1a,又可检测STl,对纯化ST的检测限为0.2~0.4ng,其敏感性高于乳鼠试验。但对乳鼠法中呈阳性反应的肠结肠炎耶尔森菌的ST却不起反应。

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