1．为了洗脱细菌，将900ul的K91 Kan Terrific肉汤菌液加入裂解后的细胞，并于室温下孵育20分钟。

2．将步骤1所得全部倒入含有9m1四环素浓度为0．2ug/ml的NZY培养基的50m1锥形瓶中。室温下孵育30分钟。

3．为了测定fd噬菌体的产出量，将步骤2所得分别取1ul、10ul及100ul，涂布到四环素浓度为40ug/ml的LB琼脂平板中，每种涂布3个。可以采用玻璃或金属刮子，或无菌玻璃珠，来涂布细菌。将平板置于37℃孵育16小时（过夜）。

4．为了测定每份器官或组织的噬菌体总产出量，将每个平板上的克隆（TU）数目除以涂板的体积（1ul、10ul或100ul），然后再乘以10000ul。这样计算的原因是：步骤2中稀释了10倍，而加到沉淀中的是1000ul K91Kan菌液。例如：在脑组织的10ul培养基平板中平均有200TU的噬菌体，那么在每克脑组织中噬菌体总产出量为2．0×105TU。对每份器官和组织中三个平板的计数取平均值，并对数据作图。

5．为了扩增及纯化回收的“噬菌体， 当把样品涂布在平板上以后，在2L的锥形瓶中将步骤2所剩的9．67ml样品加到含40ug/ml四环素的200ml的NZY培养基中，于37℃摇瓶培养16小时（过夜）。

6．把过夜培养的菌液倒入300m1的离心管中，在Sorvall@SLA—3000转子中以8000r/min离心15分钟。通过带0．2um滤膜的真空抽滤瓶将上清过滤到500ml无菌瓶中。

7，通过向每200ml噬菌体中添加40ml的PEG/NaCl溶液，把上清中的噬菌体沉淀下来，并于4℃孵育4～16小时。

8．将沉淀噬菌体置于有SLA—3000或平衡转子的Sorvall@中， 以8000r/min离心40分钟。弃去上清，接着将离心管倒置于纸巾上，并将每份噬菌体的水分排尽，只留下白色沉淀。

9．用20m1的1×TBS溶解每份噬菌体沉淀，将其转入一个30ml的Oak Ridge离心管中并摇匀。通过加4ml的PEG/NaCl溶液，再次沉淀噬菌体，并置于冰上1小时。

10．将沉降后的噬菌体置于Sorvall@SS—34或同等的转子中，以10000r/min（11984g）离心10分钟。弃去上清，接着将离心管倒置于纸巾上，并将每份噬菌体的水分排尽，只留下白色沉淀。

11．用500ul～1m1含0．1％明胶的1XTBS溶解每份噬菌体沉淀，10000r/min（10640g）短暂离心5分钟，以除去未溶解的物质。将上清转入一支新的1．7m1Eppendorf管中，做好标记并保存于4℃。典型的滴定范围为108-109TU/ul。