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葡聚糖凝胶分离的目的在于“分子量”
点击次数:1178 发布时间:2014-6-9
摘要:葡聚糖凝胶常用凝胶滤过法的目的在于达到分离,它在制备的过程中会遇到的问题及如何解决一下问题,下面详细介绍。
*、葡聚糖凝胶常用的方法:
多糖的分子量测定常用的是凝胶滤过法。对于黏度大的多糖,可采用黏度法求得。亦有用蒸汽压渗透法。
原理:SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS, SDS能断裂分子内和分子间氢键,破坏蛋白质的二级和三级结构,强还原剂能使半*之间的二硫键断裂,蛋白质在一定浓度的含有强还原剂的SDS溶液中,与SDS分子按比例结合,形成带负电荷的SDS-蛋白质复合物,这种复合物由于结合大量的SDS,使蛋白质丧失了原有的电荷状态形成仅保持原有分子大小为特征的负离子团块,从而降低或消除了各种蛋白质分子之间天然的电荷差异,由于SDS与蛋白质的结合是按重量成比例的,因此在进行电泳时,蛋白质分子的迁移速度取决于分子大小。
第二、葡聚糖凝胶测定糖分子量不同观察角度
利用不同方法测定多糖分子量可以从不同角度对多糖分子量进行确证,同时也是对多糖纯度的考察。在测定过程中要注意标准品的选择,尽量使用与被测多糖结构相似的标准品,因为不同结构的标准品虽然其分子量相同而在一定条件下所表现的分子量会有所不同。多糖分子量的测定没有一种的方法,其分子量只代表相似链长的平均配比而不是确切的分子大小。往往用不同的方法会得到不同的分子量。
第三、葡聚糖凝胶制备过程
制备过程编辑葡聚糖凝胶微珠表面形态存在粒子凝集和表面粗糙两种不良情况。粒子凝集的原因是分散剂聚醋酸乙烯酯(PVAc)在碱性条件下水解导致亲水性增强,以及交联反应的中间产物具有絮凝作用。另外,交联后粒子粘度增大也可导致凝集。葡聚糖微珠表面粗糙是由于后处理时PVAc的微小附着物没有从微珠表面*除去而造成的。作者采取低温分散、交联,分步加入交联剂和调节搅拌速度等控制手段,有效地解决了上述问题。
第四、葡聚糖凝胶分离的目的
葡聚糖凝胶是由直链的葡聚糖分子和交联剂3—氯1,2—环氧丙烷交联而成的具有多孔网状结构的高分子化合物。凝胶颗粒中网孔的大小可通过调节葡聚糖和交联剂的比例来控制,交联度越大,网孔结构越紧密;交联度越小,网孔结构就越疏松,网孔的大小决定了被分离物质能够自由出入凝胶内部的分子量范围。可分离的分子量范围从几百到几十万不等。
葡聚糖凝胶层析,是使待分离物质通过葡聚糖凝胶层析柱,各个组分由于分子量不相同,在凝胶柱上受到的阻滞作用不同,而在层析柱中以不同的速度移动。分子量大于允许进入凝胶网孔范围的物质*被凝胶排阻,不能进入凝胶颗粒内部,阻滞作用小,随着溶剂在凝胶颗粒之间流动,因此流程短,而先流出层析柱;分子量小的物质可*进入凝胶颗粒的网孔内,阻滞作用大,流程延长,而zui后从层析柱中流出。若被分离物的分子量介于*排阻和*进入网孔物质的分子量之间,则在两者之间从柱中流出,由此就可以达到分离目的。