牛口蹄疫抗原（FMD）elisa试剂盒分析

最近更新时间：2012-8-13

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牛口蹄疫抗原（FMD）elisa试剂盒使用目的： 
 本试剂盒用于测定牛血清、血浆及相关液体样本中口蹄疫抗原（FMD）含量。 
牛口蹄疫抗原（FMD）elisa试剂盒实验原理 
 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中牛口蹄疫抗原（FMD）水平。用纯化的牛口蹄疫（FMD）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入口蹄疫抗原（FMD），再与HRP标记的口蹄疫（FMD）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的口蹄疫抗原（FMD）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中牛口蹄疫抗原（FMD）浓度。 
试剂盒组成 
1 30倍浓缩洗涤液 20ml×1瓶 7 终止液 6ml×1瓶 
2 酶标试剂 6ml×1瓶 8 标准品（480ng/L） 0.5ml×1瓶 
3 酶标包被板 12孔×8条 9 标准品稀释液 1.5ml×1瓶 
4 样品稀释液 6ml×1瓶 10 说明书 1份 
5 显色剂A液 6ml×1瓶 11 封板膜 2张 
6 显色剂B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1个 
标本要求 
 1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融 
 2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 
操作步骤 
标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。 
240ng/L 5号标准品 150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液 
120ng/L 4号标准品 150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液 
60ng/L 3号标准品 150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液 
30ng/L 2号标准品 150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液 
15ng/L 1号标准品 150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液 
加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品zui终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 
温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。 
配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用 
洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。 
加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 
温育：操作同3。 
洗涤：操作同5。 
显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟. 
终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。 
测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。

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