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微量蛋白胶回收试剂盒使用说明书

时间:2013/12/24阅读:467
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产品及特点    十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)不仅可用于检测蛋白质的相对分子质量,而且也是分离纯化蛋白质的重要工具之一,随着蛋白质技术的微量化,有必要从凝胶中回收蛋白质以用于制备抗体、免疫印迹、氨基酸组分分析或末端序列测定等。本产品就是专门为此用途开发的微量蛋白胶回收法,它具有下列特点:
1.    简单,不需要复杂而昂贵的仪器(如电洗脱仪)。
2.    适用于变性胶(SDS-PAGE)和非变性胶。
3.    回收率一般在50-90%之间(跟蛋白质大小,洗脱时间相关)。
4.    跟后续的实验兼容,包括2-D电泳、质谱测序等。
规格及成分    成份    50次小盒包装
(90402-50)
溶液A    10 mL
溶液B    50 mL
微型离心管研磨杵
(CAT:80603A)    50只
使用手册    1份

运输及保存    常温运输,4℃保存(微型离心管研磨杵可以室温保存),有效期一年。
自备试剂    无
使用方法    1.    按常规方法进行变性(SDS-PAGE)或非变性蛋白电泳。
2.    切取含目的蛋白的胶(尽可能地把多余的胶切除,否则会影响回收效率)。注意:固定和染色后蛋白回收效果很差,所以建议把样品分多孔上样,电泳后只切其中一个样孔的胶条进行固定和染色,然后将此胶条放回到在整体胶中原来的位置,通过显色胶条上的蛋白条带找到在未染色胶上对应区域,并切下此区域的胶进行回收。
3.    将切下的胶块转移到1.5 mL塑料离心管中。
4.    用研磨杵充分将胶块压磨成尽可能细小的碎片。
5.    加入200 uL溶液A,4℃摇晃洗脱至少2-16小时(过夜)。此时将溶液B放在冰箱预冷。
6.    10,000 g离心10分钟,转移上清到新的离心管中,注意不要吸取碎胶。
7.    加入5倍体积的预冷的溶液B,摇晃混匀。
8.    -20℃放置至少10-30分钟。
9.    室温12,000 g离心5-20分钟,弃上清。
10.    室温充分晾干,得到的沉淀即为回收的蛋白质。回收的蛋白质可溶解在适当的缓冲液中,可用于后续实验(2-D电泳、质谱测序等)。

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