一、植物根中蛋白质的抽取

1.  sample,液氮研磨

2.  装1.5 ml centrifuge 用tube

3.  加 1 M KH₂PO₄+K₂HPO₄ 700 μl

4.  12000 rpm,4度,10-15minite

5.  取上层液，蛋白质就在里面

二、蛋白质样品制备

秧苗蛋白质样品的提取按Davermal等（1986）的方法进行。100 mg材料剪碎后加入10 mgPVP-40（聚乙烯吡咯烷酮）及少量石英砂，用液氮研磨成粉，加入1.5 ml 10% （丙酮配制，含10 mM即0.07% β-巯基乙醇），混匀，-20 ℃沉淀1小时，4 ℃，15000 r/min离心15 min，弃上清，沉淀复溶于1.5 ml冷丙酮（含10 mM β-巯基乙醇），再于-20 ℃沉淀1小时，同上离心弃上清，（有必要再用80%丙酮（含10 mMβ-巯基乙醇所得沉淀低温冷冻真空抽干。按每mg干粉加入20 μl（可调）UKS液[9.5 M尿素，5 mM碳酸钾，1.25%SDS，0.5%DTT（二硫苏糖醇），2% Ampholine （Amersham Pharmacia Biotech Inc，pH3.5-10），6% Triton X-100]，37 ℃温育30min，期间搅动几次，28度 （温度低，高浓度的尿素会让溶液结冰）16000 r/min离心15 min，离心力越大时间长一点越好!上清即可上样电泳。或者-70度保存。

三、组织：肠黏膜

目的：WESTERN BLOT检测凋亡相关蛋白的表达应用TRIPURE提取蛋白质步骤：含蛋白质上清液中加入异丙醇：（1.5 ml每1 mlTRIPURE用量）倒转混匀，置室温10 min 离心：12000 g，10 min，4度，弃上清加入0.3 M盐酸胍/95%乙醇：（2 ml每1 mlTRIPURE用量）振荡，置室温20 min 离心： 7500 g，5 min，4度，弃上清重复0.3 M盐酸胍/95%乙醇步2次沉淀中加入100%乙醇 2 ml 充分振荡混匀，置室温20 min 离心： 7500 g，5 min，4度，弃上清吹干沉淀 1%SDS溶解沉淀离心：10000 g，10 min，4度取上清-20度保存（或可直接用于WESTERN BLOT）存在的问题：加入1%SDS后沉淀不溶解，还是很大的一块，4度离心后又多了白色沉定，SDS结晶测浓度，含量才1 mg/ml左右。解决：提蛋白试剂盒，另外组织大小适中，要碎，立即加2X BUFFER，然后煮5-10分钟，效果很好的。

四、植物组织蛋白质提取方法 三氯醋酸—丙酮沉淀法

1.  在液氮中研磨叶片

2.  加入样品体积3倍的提取液在-20 ℃的条件下过夜，然后离心（4 ℃ 8000 rpm以上1小时）弃上清。

3.  加入等体积的冰浴丙酮（含0.07%的β-巯基乙醇），摇匀后离心（4 ℃ 8000 rpm以上1小时），然后真空干燥沉淀，备用。

4.  上样前加入裂解液，室温放置30分钟，使蛋白充分溶于裂解液中，然后离心（15 ℃ 8000 rpm以上1小时或更长时间以没有沉淀为标准），可临时保存在4 ℃待用。

5.  用Brandford法定量蛋白，然后可分装放入-80 ℃备用。药品：提取液：含10%TCA和0.07%的β-巯基乙醇的丙酮裂解液：2.7 g尿素0.2 g CHAPS溶于3 ml灭菌的去离子水中（终体积为5 ml），使用前再加入1 M的DTT65 μl/ml。这种方法针对双向电泳，杂质少，离子浓度小的特点!当然单向电泳也同样适用，只是电泳的条带会减少!

五、植物材料：水稻苗，叶鞘，根

1.  200毫克样品置于冰上磨碎

2.  加lysis buffer，离心，10000 rpm，4度，5 min取上清

3.  重复离心5 min

4.  lysis buffer：urea np-40 ampholine 2-me pvp-40

六、植物组织蛋白质提取方法 

1.  根据样品重量（1 g样品加入3.5 ml提取液，可根据材料不同适当加入），准备提取液放在冰上。 

2.  把样品放在研钵中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上静置（3-4小时）。 

3.  用离心机离心8000 rpm 40 min 4 ℃或11100 rpm 20 min 4 ℃ 

4.  提取上清夜，样品制备完成。蛋白质提取液：300 ml

（1）1 M tris-HCl（pH 8）45 ml

（2）咁油（Glycerol）75 ml

（3）聚乙烯吡咯烷酮（Polyvinylpolypyrrordone） 6 g 这种方法针对SDS-Page，垂直板电泳