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农杆菌感受态细胞的制备

时间：2012-6-25阅读：318

农杆菌感受态细胞的制备

取-70℃保存的EHA105于含50μg/ml*平板划线，28℃培养。

挑取单菌落接种于5ml YM液体培养基中，220rpm 28℃振荡培养12-16 hr。

取2ml菌液转接于100ml YM液体培养基中，28℃220rpm振荡培养至OD600=0.5。

转入无菌离心管，5000rpm离心5min,去上清液。

加入10ml预冷的0.1M的CaCl2溶液，轻轻悬浮细胞，冰上放置20min。4℃5000rpm离心5min，去上清。

加入4ml预冷的含15%甘油的0.1M的CaCl2溶液，轻轻悬浮。

农杆菌悬浮液分装于无菌Eppendorf管中，每管200μl冻存于-70℃。

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