小鼠免疫球蛋白E（IgE）酶联免疫分析（ELISA）

小鼠免疫球蛋白E（IgE）酶联免疫分析（ELISA）

试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。
药品名称：
通用名：小鼠免疫球蛋白E（IgE）酶联免疫分析试剂盒
使用目的：
本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆、或其它组织液中免疫球蛋白E（IgE）含量。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠免疫球蛋白E（IgE）水平。用纯化的IgE 抗
体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入小鼠免疫球蛋白E（IgE），再
与HRP 标记的羊抗小鼠抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底
物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。
颜色的深浅和样品中的免疫球蛋白E 呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD
值），通过标准曲线计算样品中小鼠免疫球蛋白E（IgE）浓度。
试剂盒组成
1 25 倍浓缩洗涤液30ml×1 瓶7 终止液6ml×1 瓶
2 酶标试剂6ml×1 瓶8 标准品（540 μg/ml） 0.5ml×1 瓶
3 酶标包被板12 孔×8 条9 标准品稀释液1.5ml×1 瓶
4 样品稀释液6ml×1 瓶10 说明书1 份
5 显色剂A 液6ml×1 瓶11 封板膜2 张
6 显色剂B 液6ml×1/瓶12 密封袋1 个
标本要求
1．标本采集后尽早进行实验。
2．待检血清1：200 稀释：具体为在试管中先按1：20 稀释待检血清（190μl 样品稀释
液中加10μl 待检血清，混匀），再按1：10 稀释待检血清（取10μl1：20 稀释的
待检血清加90μl 的样品稀释液，混匀即可）
3．不能检测含NaN3 的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
4．可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。
操作步骤
1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10 孔，在*、第二孔中分别加标
准品100μl，然后在*、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从*孔、第二
孔中各取100μl 分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，
混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl 弃掉，再各取50μl 分别加到第五、第六孔
中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各
取50μl 分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混
匀后从第七、第八孔中分别取50μl 加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准
品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl 弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，
浓度分别为（360 μg/ml，240μg/ml ，120μg/ml，60μg/ml， 30μg/ml）。
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样
品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样
品zui终稀释度为5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混
匀。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。
4. 配液：将20 倍浓缩洗涤液用蒸馏水20 倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此
重复5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
15 分钟.
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。测定应在加终止
液后15 分钟以内进行。
计算
以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的
OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD 值计算出标
准曲线的直线回归方程式，将样品的OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，
即为样品的实际浓度。
注意事项
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未
用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间
控制在5 分钟内，如标本数量多，使用排枪加样。
4． 请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD 值
大于标准品孔*孔的OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计
算时请zui后乘以总稀释倍数（×n×1000）。
5． 严格按说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准
6．底物请避光保存。
7．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
检测范围：
20μg/ml-400μg/ml
规格：
96 人份/盒
保存条件及有效期
1．试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6 个月