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血清
细胞分离试剂
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PCR技术:样品处理与注意事项2017/8/16
一、样品处理DNA是染色体的主要组成部分,是PCR的扩增模板。要进行PCR,研究DNA结构与功能或者用于诊断目的,首先必须从生物体内提取DNA。DNA往往以核蛋白形式存在,其分子量大(人的染色体DNA...
PCR反应程序2017/8/14
1.常规程序将PCR反应所需的成分配置完后,在PCR仪上于94-96℃预加热几十秒至几分钟,使模板DNA充分变性,然后进入扩增循环。在每一个循环中,先于94℃保持30秒钟使模板变性,然后将温度降到复性...
PCR Trouble shooting guide2017/8/7
1.假阴性,不出现扩增条带pcr反应的关键环节有①模板核酸的制备,②引物的质量与特异性,③酶的质量,④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。模板:①模板中含有杂蛋白质,②模板中含有Ta...
PCR引物设计的原则与要点2017/8/2
引物设计有3条基本原则:首先引物与模板的序列要紧密互补,其次引物与引物之间避免形成稳定的二聚体或发夹结构,再次引物不能在模板的非目的位点引发DNA聚合反应(即错配)。引物设计应注意如下要点:1引物的长...
随机引物PCR技术2017/7/24
一.实验原理聚合酶链式反应(Polymerasechainreaction)简称PCR,它是一种DNA体外扩增技术。1985年美国的Mullis等人发明了PCR技术,在体外利用模板DNA、特定的寡聚核...
哺乳动物细胞总RNA的分离2017/7/18
一、细胞的裂解单层细胞的裂解悬浮培养的细胞或组织单细胞悬液的裂解a.单层细胞的裂解a)吸出培养液,以7ml用冰预冷的无钙镁离子磷酸缓冲盐溶液PBS冲洗细胞培养皿内的单层细胞,重复1次,将平板置于冰上直...
DNA序列分析(Sanger酶法)2017/7/10
一、试剂1、10×TBE(pH8.3):2、46%尿素溶液:3、20%聚丙烯酰胺溶液4、10%过硫酸胺5、引物6、模板7、DNA聚合酶8、放射性标记的dNTP和ddNTP贮存液9、TEMED二、操作方...
RNAi的特点与生物学功能2017/7/4
RNAi所产生的基因沉默具有如下特点:1)性。Elbashir等在研究中发现分别为25nmol/L与100nmol/L的起始双链RNA产生的结果是一样的,只是高浓度起始的更有效些。将双链RNA浓度降低...
脊髓动物细胞中特殊的RNAi现象2017/6/29
1.由长dsRNA引起的非特异性基因沉默寻找哺乳动物细胞中存在RNAi的证据颇费了一番周折。将较长的dsRNA(超过30个碱基对)转染几种特定脊髓动物细胞系统如小鼠的早期胚胎中,斑马鱼和中华仓鼠卵巢细...
RNA操作注意事项与实验技巧2017/6/26
操作注意事项:由于rna酶的广泛存在与难以灭活的顽固特性。使得RNA的提取纯化和后续工作变得非常困难。为了保证RNA的研究工作成功,请仔细阅读下列注意事项,相信它能帮助您解决常见的问题。归根究底,RN...
质粒DNA的分离、纯化和鉴定2017/6/22
把一个有用的目的DNA段通过重组DNA技术,送进受体细胞中去进行繁殖和表达的工具叫载体(Vector)。细菌质粒是重组DNA技术中常用的载体。质粒(Plasmid)是一种染色体外的稳定遗传因子,大小从...
PCR技术应用进展2017/6/15
原位PCR就是在组织细胞里进行pcr反应,它结合了具有细胞定位能力的原位杂交和高度特异敏感的PCR技术的优点,是细胞学科研与临床诊断领域里的一项有较大潜力的新技术.原位PCR是Hasse等于1990年...
PCR反应体系与反应条件2017/6/12
标准的pcr反应体系:10×扩增缓冲液10ul4种dNTP混合物各200umol/L引物各10~100pmol模板DNA0.1~2ugTaqdna聚合酶2.5uMg2+1.5mmol/L加双或三蒸水至...
穿孔技术在动物克隆及转基因中的应用2017/6/7
InstituteofOrthopedicOncology,FourthMilitaryMedicalUniversity,Xi"an710038,China摘要电穿孔技术利用电场造成细胞膜的改变从而...
士锋分子生物学的三部分研究内容2017/5/31
分子生物学主要包含以下三部分研究内容:1核酸的分子生物学核酸的分子生物学研究核酸的结构及其功能。由于核酸的主要作用是携带和传递信息,因此分子遗传学(moleculargenetics)是其主要组成部分...

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