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肝脏细胞RNA的提取

时间:2015-11-19阅读:753
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一.原理

RNA提取技术不仅是分子生物学技术的重要组成部分,也是功能基因组学科研技术的重要基础。从RNA水平研究生物体内基因的调控机制,已成为分子生物学研究的一个重要手段。对某一生物或组织进行性状研究,首先要获得该性状基因,从组织细胞中分离完整的RNA对于分子克隆和基因表达分析等实验是至关重要的,如Northern印迹及杂交分析、cDNA合成等实验的成效在很大程度上取决于RNA的质量。利用提取的RNA人们可以对特定的基因表达进行定量的检测,从分子水平的了解细胞生命活动的规律。通常一个典型的哺乳动物细胞约含有10-5μgRNA ,其中80%~85%为rRNA(主要是28S、18 S和5.8 S、5S四种类型);10%~15%为tRNA和核内小分子RNA。

这些高峰度的RNA的大小和序列确定,可通过凝胶电泳、密度梯度离心、阴离子交换层析和高压液相层析(HPLC)分离。相反,占RNA总量1%~5%的为mRNA 。mRNA 虽然大小和核苷酸序列各不相同,从数百至数千碱基不等,但大多数真核细胞mRNA在其3"端均有一寡聚腺苷酸(polyA)组成的尾,其长度一般足以吸附于寡聚脱氧胸苷酸—纤维素

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