细胞培养常用设备及实验技巧

常用设备 
准备室的设备： 
单蒸馏水蒸馏器、双蒸馏水蒸馏器、酸缸、烤箱、高压锅、储品柜（放置未消毒物品）、储品规（放置消毒过的物品）、包装台。 
配液室的设备： 
扭力天平和电子天平（称量药品）、PH计（测量培养用液PH值）、磁力搅拌器（配置溶液室搅拌溶液）。 
培养室的设备： 
液氮罐、储品柜（存放杂物）、日光灯和紫外灯、空气净化器系统、低温冰箱（-80℃）、空调、二氧化碳缸瓶、边台（书写实验记录）。必须放在无菌间的设备：离心机（收集细胞）、超净工作台、倒置显微镜、CO2孵箱（孵育培养物）、水浴锅、三氧消毒杀菌机、4℃冰箱（放置serum和培养用液）。 
无菌操作 
无菌室的灭菌： 
1.定期打扫无菌室：每周打扫一次，先用自来水拖地、擦桌子、超净工作台等，然后用3‰来苏尔或者新洁尔灭或者0.5％过氧乙酸擦拭。 
2.CO2孵箱（培养箱）灭菌：先用3‰新洁尔灭擦拭，然后用75％酒精擦拭或者0.5％过氧乙酸，再用紫外灯照射 
3.实验前灭菌：打开紫外灯、三氧杀菌机、空气净化器系统各20-30分钟 
4.实验后灭菌：用75％酒精（3‰新洁尔灭）擦拭超净台、边台、倒置显微镜的载物台。 
实验人员的无菌准备： 
1.肥皂洗手。 
2.穿好、带好隔离帽、口罩、放好拖鞋 
3.用75％酒精棉球擦净双手。 
无菌操作的演示： 
1.凡是带入超净工作台内的酒精、PBS、培养基、的瓶子均要用75％酒精擦拭瓶子的外表面 
2.靠近酒精灯火焰操作。 
3.器皿使用前必须过火灭菌 
4.继续使用的器皿（如瓶盖、滴管）要放在高处，使用时仍要过火。 
5.各种操作要靠近酒精灯，动作要轻、准确，不能乱碰。如吸管不能碰到废液缸。 
6.吸取两种以上的使用液时要注意更换吸管，防止交叉污染。 
器械的清洗和消毒 
玻璃器械洗消： 
一、新的玻璃器皿的洗消： 
1.自来水刷洗，除去灰尘。 
2.烘干、泡盐酸：烤箱中烘干，然后再浸入5％中12小时以除去脏物、铅、砷等物。 
3.刷洗、烘干：12小时后立即用自来水冲洗，再用洗涤剂刷洗，自来水冲干净后用烤箱烘干。 
4.泡酸、清洗：用清洁液（重铬酸钾120g：浓硫酸200ml：蒸馏水1000ml）浸泡12小时，然后从酸缸内捞出器皿用自来水冲洗15次，zui后蒸馏水冲洗3-5次和用双蒸水过3次。 
5.烘干、包装：洗干净后先烘干，然后用牛皮纸（油光纸）包装。 
6.高压消毒：包装好的器皿装入高压锅内盖好盖子，打开开关和安全阀，当蒸气成直线上升时，关闭安全阀，当指针指向15磅时，维持20-30分钟。 
7.高压消毒后烘干 
二、旧的玻璃器皿的洗消： 
1．刷洗、烘干：使用过的玻璃器皿可直接泡入来苏尔液或洗涤剂溶液中，泡过来苏尔溶液（洗涤剂）的器皿要用清水刷洗干净，然后烘干。 
2.泡酸、清洗：烘干后泡入清洁液（酸液），12小时后从酸缸内捞出器皿立即用自来水冲洗（避免蛋白质干涸后粘附于玻璃上难以清洗），再用蒸馏水冲洗3次。 
3.烘干、包装：洗干净的器皿烘干后取出用牛皮纸（油光纸）等包装，以便于消毒储存及防止灰尘和再次被污染。 
4.高压消毒：包装好的器皿装入高压锅内，盖好盖子，打开开关和安全阀，随着温度的上升安全阀冒出蒸气，当蒸气成直线冒出3-5分钟后，关闭安全阀，气压表指数随之上升，当指针指向15磅时，调节电开关维持20-30分钟即可。（玻璃培养瓶消毒前可将胶帽轻轻盖上） 
5.烘干备用：因为高压消毒后器皿会被蒸气打湿，所以要放入烤箱内烘干备用。 
金属器械洗消： 
金属器皿不能泡酸，洗消时可先用洗涤剂刷洗，后用自来水冲干净，然后用75％酒精擦拭，再用自来水，然后用蒸馏水冲洗，再烘干或空气中晾干。放入铝制盒内包装好在高压锅内15磅高压（30分钟）消毒，再烘干备用。