血清热灭活―浪费时间？

血清的热灭活是很多培养者感兴趣的话题，价格不菲的血清中含有诸如生长因子，维生素，氨基酸等珍贵物质，而将它们置于50℃以上的温度长达30分钟是*没有必要的。尽管如此，在大多数实验室之中血清的热灭活还是作为常规来执行，多数实验者并没有考虑热处理对血清中的生长因子，氨基酸等成分带来的负面影响，在我们的技术中zui常被提到的就是否该对血清进行热灭活，下面我们就对胎牛血清的热灭活进行一些探讨和解释。

根据调查，至少70％的研究者对血清的灭活仅仅是因为遵照常规操作，或者说认为是理所当然的。常规灭活建议的温度在45℃到62℃之间,而时间则从15分钟到60分钟不等.其中zui常用的手法是56℃热处理30分钟。随着血清采集、处理、加工工艺的提高，许多早先认为是热灭活的原因已经不再成立，只有少数对血清进行热灭活的研究者在实验中证实了这一步骤的有效性和必要性。

Pinyopummintr等证明血清去除灭活步骤不影响牛胚胎的发育分化［2］；有研究结果［3］证实热灭活步骤减弱了胎牛血清和小牛血清对细胞的促粘附作用，在用SV-BHK、BALB-3T3、CV－1、FS-4细胞对细胞粘附实验中，热灭活对胎牛血清的影响小于对小牛血清的影响。

我们调查了热灭活对胎牛血清以及对其中不同细胞株生长能力的影响。通过比较11个不同细胞株，发现其中热灭活对6 个细胞株（HBAE，MDBK，Vero，成纤维细胞，MRC-5）的生长带来负面影响，三个细胞株（FOX-NY，MDCK和CHO-K1）不受热灭活的影响，而只有两个细胞株（Balb/3T3，Sp2/0Ag14 hybrid），在热灭活之后，细胞生长有轻微的改善。所以，在正常的操作下，热灭活通常对细胞的生长没有明显的促进作用。

在正常操作下，热灭活经常给血清产品带来负面的影响，对血清的加热经常导致血清中沉淀的产生，而导致的沉淀又常常被认为是微生物的污染。注意到这个现象之后，为了验证污染的存在，或者促进沉淀的溶解，许多培养者往往将血清放置37℃温育。这却往往使情况变得更糟，血清中的蛋白进一步的析出，为了确信血清未被污染，进行的镜检，无菌培养试验，和革兰氏染色试验更是浪费了实验者大量的时间和精力。

总之，多数细胞培养中血清的热灭活并不是必要的。很多场合下，热灭活并不会改善细胞的生长，却降低了支持细胞生长的能力。即使在少数有促进的情况下，其促进的比率也是微不足道的。另外，血清的热灭活导致的沉淀常常被认为是微生物的污染，从而给用户和供应商都带来不必要的麻烦。我们建议，对于那些对血清进行灭活的用户，需要通过试验来证实其必要性，确定灭活的适当条件；在灭活过程中，需要严格认真监测，并选择一个可重复的方案进行操作。

参考文献：

1. Triglia, R.P., Linscott, W.D. 1980. Titers of nine complement components, conglutinin and C3binactivator in adult and fetal bovine sera. Mol. Immunol. 17:741-748.

2. Pinyopummintr, T., and Bavister, B.D. 1994.Development of bovine Embryos in a Cell-Free Medium - Effects of Type of Serum, Timing of its Inclusion and Heat Inactivation. Theriogenology. 41:1241-1249.

3. Giard, D.J. 1987. Routine Heat Inactivation of Serum Reduces its Capacity to Promote Cell Attachment. In Vitro Cellular & Developmental Biology. 23:691-697.