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可溶性粘附分子检测
点击次数:448 发布时间:2012-11-1
目前对于血清中可溶性粘附分子的检测多采用ELISA试剂盒,5种可溶性粘附分子在正常人血浆中浓度的变化范围及某些疾病状态下的变化。不同来源的试剂盒由采用抗体特异性和亲和力的差别、以及标准品不同,所得出的正常值范围有较大差异,因此有必要对这种检测手段加以标准化。值得注意的采用这种方法检测得到的浓度值未必能够准确反映可溶性粘附分子的实际水平,因为可溶性粘附分子除以游离状态存在外,还可以与细胞表面游离的配体结合,用常规的ELISA法无法检测结合状态的可溶性粘附分子。此外,对所测得的可溶性粘附分子水平应从粘附分子产生和清除两方面进行分析,产生的增加和清除的减少都可造成可溶性粘附分子血中水平的升高,是两个不同原因所导致的相同结果。
可溶性粘附分子elisa试剂盒,种属齐全,检测程序为:
在使用前,将所有试剂和样品室温。再次离心样品解冻后测定前。据建议,所有样品和标准来测定一式两份。
1。准备好所有试剂,工作标准和样品在前面的章节中。
2。请确定井数的使用,并把任何剩余的井和入袋干燥剂,密封保鲜袋,将未使用的井在4°C的含量布局表
。每孔加入100μl的标准和样品。封面用胶粘带提供。孵育2小时,在37℃下一盘布局记录标准和样品检测。
4。每孔中取出的液体,不洗。
5。向每孔中加入100μl*抗体(1倍)。盖上一个新的胶粘带。孵育1小时,在37℃下(*抗体(1X)可能会出现混浊。预热至室温,轻轻混匀,直到出现均匀解决方案。)
6。吸液的各孔和洗涤,共洗涤三次重复该过程两次。洗净,每孔填充洗涤缓冲液(200μL)使用喷瓶,多道移液器,歧管器,或autowasher,和,静置2分钟,*清除液体的每一步是*的良好的性能。zui后一次洗涤后,清除任何剩余洗涤缓冲液的吸ordecanting。倒置板和涂抹对干净的纸巾。
7。向每孔中加入100μl的HRP-抗*蛋白(1×)。量的微量滴定板,用一个新的粘接剂条。温育1小时,在37℃下
8。重复的愿望/洗涤过??程中,在步骤6的5倍。
9。将90μlTMB底物添加到每个孔中。孵育15-30分钟,在37℃下避光
10。一站式解决方案,每孔加入底物,轻轻晃动酶标板,以确保充分混合。
11。在5分钟内,设置至450nm,使用酶标仪测定各孔的光密度。如果波长校正,设置为540nm或570nm处。在540nm或570nm波长在450nm处的读数减去读数。该减法校正板的光学缺陷。在450nm处未经修正读数直接,可能会比较高,不太准确。