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犬钩端螺旋体试剂盒说明书
点击次数：864 发布时间：2012-12-11
犬钩端螺旋体试剂盒*，96T包装。科研使用。
原理
原理
采用定量夹心酶联免疫技术。抗体具体为FGF6已经被预先涂到微孔板。标准和样品吸入井和任何FGF6目前被绑定的固定化抗体。*共轭的抗体特异性FGF6除去任何未结合的物质后，加入到孔中。抗*蛋白共轭的辣根过氧化物酶（HRP）的洗涤后，加入到孔中。经过洗涤，以除去任何未结合的抗*蛋白的酶试剂，底物溶液加入到孔中，显色成比例的量的初始步骤中的约束的FGF6。彩色显影被停止并测量的颜色的强度
检测程序：
在使用前，将所有试剂和样品室温。再次离心样品解冻后测定前。据建议，所有样品和标准来测定一式两份。
1。准备好所有试剂，工作标准和样品在前面的章节中。
2。请确定井数的使用，并把任何剩余的井和入袋干燥剂，密封保鲜袋，将未使用的井在4°C的含量布局表
。每孔加入100μl的标准和样品。封面用胶粘带提供。孵育2小时，在37℃下一盘布局记录标准和样品检测。
4。每孔中取出的液体，不洗。
5。向每孔中加入100μl*抗体（1倍）。盖上一个新的胶粘带。为1小时孵育在37℃下（*抗体（1X）可能会出现混浊。预热至室温，轻轻混匀，直到出现均匀解决方案。）
6。吸液的各孔和洗涤，共洗涤三次重复该过程两次。洗净，每孔填充洗涤缓冲液（200μL）使用喷瓶，多道移液器，歧管器，或autowasher，和，静置2分钟，*清除液体的每一步是*的良好的性能。zui后一次洗涤后，清除任何剩余洗涤缓冲液的吸ordecanting。倒置板和涂抹对干净的纸巾。
7。向每孔中加入100μl的HRP-抗*蛋白（1×）。量的微量滴定板，用一个新的粘接剂条。温育1小时，在37℃下
8。重复的愿望/洗涤过??程中，在步骤6的5倍。
9。将90μlTMB底物添加到每个孔中。孵育15-30分钟，在37℃下避光
10。一站式解决方案，每孔加入底物，轻轻晃动酶标板，以确保充分混合。
11。在5分钟内，设置至450nm，使用酶标仪测定各孔的光密度。如果波长校正，设置为540nm或570nm处。在540nm或570nm波长在450nm处的读数减去读数。该减法校正板的光学缺陷。在450nm处未经修正读数直接，可能会比较高，不太准确。
操作步骤
1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
检测程序：
在使用前，将所有试剂和样品室温。再次离心样品解冻后测定前。据建议，所有样品和标准来测定一式两份。
1。准备好所有试剂，工作标准和样品在前面的章节中。
2。请确定井数的使用，并把任何剩余的井和入袋干燥剂，密封保鲜袋，将未使用的井在4°C的含量布局表
。每孔加入100μl的标准和样品。封面用胶粘带提供。孵育2小时，在37℃下一盘布局记录标准和样品检测。
4。每孔中取出的液体，不洗。
5。向每孔中加入100μl*抗体（1倍）。盖上一个新的胶粘带。为1小时孵育在37℃下（*抗体（1X）可能会出现混浊。预热至室温，轻轻混匀，直到出现均匀解决方案。）
6。吸液的各孔和洗涤，共洗涤三次重复该过程两次。洗净，每孔填充洗涤缓冲液（200μL）使用喷瓶，多道移液器，歧管器，或autowasher，和，静置2分钟，*清除液体的每一步是*的良好的性能。zui后一次洗涤后，清除任何剩余洗涤缓冲液的吸ordecanting。倒置板和涂抹对干净的纸巾。
7。向每孔中加入100μl的HRP-抗*蛋白（1×）。量的微量滴定板，用一个新的粘接剂条。温育1小时，在37℃下
8。重复的愿望/洗涤过??程中，在步骤6的5倍。
9。将90μlTMB底物添加到每个孔中。孵育15-30分钟，在37℃下避光
10。一站式解决方案，每孔加入底物，轻轻晃动酶标板，以确保充分混合。
11。在5分钟内，设置至450nm，使用酶标仪测定各孔的光密度。如果波长校正，设置为540nm或570nm处。在540nm或570nm波长在450nm处的读数减去读数。该减法校正板的光学缺陷。在450nm处未经修正读数直接，可能会比较高，不太准确。
操作步骤
1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
| 800pmol/L | 5号标准品 | 150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液 |
| 400pmol/L | 4号标准品 | 150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液 |
| 200pmol/L | 3号标准品 | 150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液 |
| 100pmol/L | 2号标准品 | 150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液 |
| 50pmol/L | 1号标准品 | 150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液 |
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品zui终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
计算结果：
建议使用专业的软“曲线专家1.3”的标准曲线，这可以从我们的下载。
平均每个标准和样品的重复读数和平均减去零标准的光学密度。
标准曲线，通过减少使用能产生四参数逻辑（4-PL）的曲线拟合的计算机软件的数据。作为一种替代方法，建立标准曲线，对在y-轴的浓度通过绘制在x-轴为每个标准的平均吸光度，并绘制一个通过在曲线图上的点的*拟合曲线。该数据可以通过绘制的FGF6浓度与日志的OD值和*拟合直线的日志，可以通过回归分析确定线性化。此过程会产生足够的，但不太的适合的数据。
如果已稀释的样品，从标准曲线上读出的浓度必须乘以稀释因子。