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人结核BCG抗原酶联免疫分析试剂盒使用说明书
点击次数：314 发布时间：2013-3-28
人结核BCG抗原酶联免疫分析试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用。
使用目的：
本试剂盒用于测定人血清样本中结核 BCG 抗原表达。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人结核 BCG 抗原表达。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，可与样品中结核 BCG 抗原相结合，经洗涤除去未结合的抗原和其他成分后再与 HRP 标记的抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物 TMB显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值），与 CUTOFF 值相比较，从而判定标本中人结核 BCG抗原的存在与否。
试剂盒组成
1
30 倍浓缩洗涤液
20ml×1 瓶
7
终止液
6ml×1 瓶
2
酶标试剂
6ml×1 瓶
8
阳性对照
0.5ml×1 瓶
3
酶标包被板
12 孔×8 条
9
阴性对照
0.5ml×1 瓶
4
样品稀释液
6ml×1 瓶
10
说明书
1 份
5
显色剂 A 液
6ml×1 瓶
11
封板膜
2 张
6
显色剂 B 液
6ml×1/瓶
12
密封袋
1 个
标本要求
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
1.编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照 2 孔、阳性对照 2 孔、空白对照 1孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）
2.加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照 50µl。然后在待测样品孔先加样品稀释液 40µl，然后再加待测样品 10µl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。
4.配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用
5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此重复 5 次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂 50µl，空白孔除外。
7.温育：操作同 3。
8.洗涤：操作同 5。
9.显色：每孔先加入显色剂 A50µl，再加入显色剂 B50µl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15 分钟.
10. 终止：每孔加终止液 50µl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。
计算和结果判定：
试验有效性：阳性对照孔平均值≥1.00; 阴性对照平均值≤0.10
临界值（CUT OFF）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15
阴性判定：样品 OD 值< 临界值（CUT OFF）者为结核 BCG 抗原阴性
阳性判定：样品 OD 值≥ 临界值（CUT OFF）者为结核 BCG 抗原阳性。
注意事项
1．操作严格按照说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用。
2．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
3．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
4． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
5．底物请避光保存。
6．试验结果判定必须以酶标仪读数为准，使用双波长检测时，参考波长为 630nm
7．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为 2M 的硫酸，使用时必须
注意安全。
保存条件及有效期
1．试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6 个月