原理
　　
　　此法采用定量夹心酶联免疫技术。抗体具体为NRP1已经被预先涂到微孔板。标准和样品吸入井和任何的NRP1目前的固定化抗体的约束。*共轭的抗体特异性NRP1除去任何未结合的物质后，加入到孔中。抗*蛋白共轭的辣根过氧化物酶（HRP）的洗涤后，加入到孔中。经过洗涤，以除去任何未结合的抗*蛋白的酶试剂，底物溶液加入到孔中，并颜色发展成比例的量的初始步骤中NRP1绑定。彩色显影被停止并测量的颜色的强度。
　　
　　精度
　　
　　批内精密度（内检测精度）：CV％<8％
　　
　　三种已知浓度的样品进行了测试20次在一个平板上进行评估。
　　
　　间精密度（精密检测间）：CV％<10％
　　
　　已知的三个样本20检测到的浓度进行了测试评估。
　　
　　样品采集和存储
　　
　　血清：使用血清分离管（SST）和全血标本在室温下两小时或4℃过夜℃，然后离心15分钟，在1000×g下。删除上清即可检测，或分装和店内样品在-20°C或-80°C。但应避免反复冻融循环。
　　
　　等离子：采集血浆中EDTA或肝素作为抗凝血剂。在2-8°C在30分钟内收集离心15分钟，1000×G。即可检测，或分装保存样本在-20°C或-80°C。但应避免反复冻融循环。
　　
　　检测程序
　　
　　在使用前，将所有试剂和样品室温。再次离心样品解冻后测定前。据建议，所有样品和标准来测定一式两份。
　　
　　1。准备好所有试剂，工作标准和样品在前面的章节中。
　　
　　2。请确定井数的使用，并把任何剩余的井和入袋干燥剂，密封保鲜袋，将未使用的井在4°C的含量布局表
　　
　　。每孔加入100μl的标准和样品。封面用胶粘带提供。孵育2小时，在37℃下一盘布局记录标准和样品检测。
　　
　　4。每孔中取出的液体，不洗。
　　
　　5。向每孔中加入100μl*抗体（1倍）。盖上一个新的胶粘带。孵育1小时，在37℃下（*抗体（1X）可能会出现混浊。预热至室温，轻轻混匀，直到出现均匀解决方案。）
　　
　　6。吸液的各孔和洗涤，共洗涤三次重复该过程两次。洗净，每孔填充洗涤缓冲液（200μL）使用喷瓶，多道移液器，歧管器，或autowasher，和，静置2分钟，*清除液体的每一步是*的良好的性能。zui后一次洗涤后，清除任何剩余洗涤缓冲液的吸ordecanting。倒置板和涂抹对干净的纸巾。
　　
　　7。向每孔中加入100μl的HRP-抗*蛋白（1×）。量的微量滴定板，用一个新的粘接剂条。温育1小时，在37℃下
　　
　　8。重复的愿望/洗涤过??程中，在步骤6的5倍。
　　
　　9。将90μlTMB底物添加到每个孔中。孵育15-30分钟，在37℃下避光
　　
　　10。一站式解决方案，每孔加入底物，轻轻晃动酶标板，以确保充分混合。
　　
　　11。在5分钟内，设置至450nm，使用酶标仪测定各孔的光密度。如果波长校正，设置为540nm或570nm处。在540nm或570nm波长在450nm处的读数减去读数。该减法校正板的光学缺陷。在450nm处未经修正读数直接，可能会比较高，不太准确。
　　
　　计算结果
　　
　　建议使用专业的软“曲线专家1.3”的标准曲线，这可以从我们的下载。
　　
　　平均每个标准和样品的重复读数和平均减去零标准的光学密度。
　　
　　标准曲线，通过减少使用能产生四参数逻辑（4-PL）的曲线拟合的计算机软件的数据。作为一种替代方法，建立标准曲线，对在y-轴的浓度通过绘制在x-轴为每个标准的平均吸光度，并绘制一个通过在曲线图上的点的*拟合曲线。该数据可以通过绘制与日志的OD值和*拟合直线的NRP1浓度的日志，可以通过回归分析确定线性化。此过程会产生足够的，但不太的适合的数据。
　　
　　如果已稀释的样品，从标准曲线上读出的浓度必须乘以稀释因子。

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