·         采用常规消化传代方式将0.25%*注入培养瓶内两次，每次加1ml（25ml培养瓶），来回轻摇1-2次，使*流过所有细胞表面，然后倒掉。

·         盖好瓶塞，将培养瓶放在倒置显微镜下观察，发现成纤维细胞变园，部分脱落，立即加入2ml有血清的培养基终止消化。

·         用弯头吸管轻轻吹打成纤维细胞生长区域（可事先在镜下用记号笔在培养瓶上划出记号）。吹打时不要用力，也不要吹打上皮细胞生长区域。吹打结束后，再用少量培养基漂洗一遍，然后加入适量培养基于瓶内继续培养，也可重复上述操作再进行一次。

·         隔几日后或下次传代时，再进行上述操作，进过几次处理，就可将成纤维细胞去除或者将两者分开。

原代培养时，如果上皮细胞和成纤维细胞分为区成混杂生长，每种细胞都以小片或区域性分布的方式生长在瓶壁上。可采用机械的方法去除不需要的细胞区域而保留需要的细胞区域，其方法步骤如下 ：

·         将要纯化细胞的培养瓶，在净化室内放在倒置显微镜监视下进行操作。

·         用硅橡胶刮子在不需要生长的细胞区域推划，使细胞悬浮在培养基中，注意不要伤及所需细胞。

·         推划后用培养基冲洗振摇两次倒掉，即可将培养基加入原瓶继续培养。

·         数日后如发现不需要的细胞又长出，可再进行上述操作，这样反复多次可以纯化细胞。操作过程中要严格无菌操作，防止污染。

·         将细胞悬液接种在一个培养内（培养基内不含血清，此时上皮细胞贴壁更慢）静置20min。

·         在倒置显微镜下观察，见部分细胞贴壁，稍加摇动也不浮起时，将细胞悬液导入另一培养瓶中。

·         继续静置培养20min，然后重复上述操作后，即可将上皮细胞和成纤维细胞分隔开，在*瓶和第二瓶以成纤维细胞为主，往后几瓶即以上皮细胞为主，下次传代时再按上述方法处理，就可使两者达到*分开的目的。

·         倒去原液，并用记号笔划出转化灶的区域。

·         用加热的微型电烙器（类似焊接用的电烙铁）将转化灶周边的细胞全部烫死，只保留转化灶细胞。在单细胞克隆筛选时，也可用此法将单个细胞周围的细胞杀死。

·         然后在适应性培养基中（50%是原液）继续培养，即可达到纯化的目的。