正常小梁细胞原代培养
实验材料:
1. 材料来源:人眼、兔眼或者猪眼等;
2. 清洗液:不含Ca2+和Mg2+的1×PBS,添加100IU/ml*、100μg/ml*,pH7.2;
3. 器械:*与无齿镊等;
4. 消毒液:200IU/ml的*生理盐水;
5. 培养液:基础液由DMEM培养基加入HEPES 6.0g/L、NaHCO32.2 g/L以及L-*0.06 g/L配制而成。应用液是在基础液内补加15%的胎牛血清、*100IU/ml、*100μg/ml,并用5% NaHCO3调节pH至7.0—7.2;
6. 培养器皿:培养瓶、24孔培养板或培养皿若干;
实验方法:
1. 将离体的供体眼球用200IU/ml的*溶液浸泡消毒5min;
2. 无菌条件下,沿角膜缘后5mm处环形剪开眼球,剪断晶状体悬韧带,去除晶状体和玻璃体;
3. 将眼前段倒放在培养皿中,在显微镜下用无齿镊把虹膜抹离角膜内皮面,暴露房角结构。用*紧贴虹膜与巩膜的附着部位,剪除色素膜;
4. 以PBS溶液或*轻微冲洗小梁组织表面。用*伸入Schlemm管,楔形剪取小梁组织。前界至Schwalbe线,后界至巩膜嵴。环形取出一块小梁组织,置于培养皿中;
5. 经PBS漂洗后将小梁*碎,几乎成浆状;
6. 用无齿镊挑起少许小梁组织,接种于24孔培养板后培养瓶皿中,轻轻铺平。待组织稍干后加入适量培养液,在CO2培养箱静置培养。第四天后开始换液,每周2次;