试剂盒名称：大鼠胱天蛋白酶9（Casp-9）ELISA试剂盒 

检测用所有试剂全部都为进口试剂，适合检测包括血清、血浆、尿液、胸腹水、灌洗液、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等标本，灵敏度*，多年专业酶免服务，我们保证对所售任何产品一概负责到底，每一份实验结果都真实可靠！各检测项目酶免（ELISA）试剂盒具备,*,定货及时,送货上门.此外,我公司还提供样本代测服务。

规格：48T/96T

大鼠胱天蛋白酶9（Casp-9）ELISA试剂盒 组织样品前处理：
①1g组织切碎后加5倍体积的TBS，用均质器均质（10次）。 组织匀浆5000×g，4℃离心20分钟
TBS：50 mmol/L Tris-HCl ,  pH 7.6, 150 mmol/L NaCl ,  蛋白酶抑制剂 [0.1 mmol/L 二异丙基氟磷酸盐 , 0.5 mmol/L 苯甲磺酰氟 , 1 g/mL甲苯磺酰-L-赖氨酸氯甲基酮盐酸盐, 1 g/mL抗痛素, 0.1 g/mL亮肽素]
②沉淀物悬浮与5倍体积的TBA/蛋白酶抑制剂（含1 mol/L蔗糖），5000×g，4℃离心20分钟。
③沉淀物中加入3倍体积的1％Triton X-100/TBS/蛋白酶抑制剂，匀质（10次）。37℃孵育15分钟后，5000×g离心20分钟。
④沉淀物和匀质物中加入3倍体积的2％SDS/TBS/蛋白酶抑制剂到。组织匀浆37℃孵育15分钟后，500000×g 25℃离心。
⑤沉淀物中加1mL 70％蚁酸到，超声破碎后5000×g 4℃离心
⑥收集上清液并用离心浓缩（Speed Vac）干燥。加100μL DMSO并短时超声破碎成悬液。零下80℃储存这个DMSO－蚁酸溶解的改组织溶液直到使用。
⑦检测时，依照说明书所写，用试剂盒中的标准稀释液溶解样本。

操作步骤：
实验开始前，请提前配置好所有试剂，试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时，用样品稀释液进行稀释，以使样品符合试剂盒的检测范围。
1. 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。
为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。
2. 弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加*标记抗体工作液 100μl（取1μl*标记抗体加99μl*标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制），37℃,60分钟。
温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干。
4. 每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液（同*标记抗体工作液） 100μl，37℃，60分钟。
5. 温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干。
6. 依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。
7. 依序每孔加终止溶液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。
8. 用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。 在加终止液后15分钟以内进行检测。

产品订购说明：
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