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上海研盟生物科技有限公司
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阅读:334发布时间:2013-01-16
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大鼠过氧化氢酶(CAT)标本要求
1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能
马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
2.不能检测含NaN3的样品,因 NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP )活性。
大鼠过氧化氢酶(CAT)操作步骤
1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀
释。
4 U/L 5 号标准品 150μl 的原倍标准品加入 150μl 标准品稀释液
2 U/L 4 号标准品 150μl 的5 号标准品加入 150μl 标准品稀释液
1 U/L 3 号标准品 150μl 的4 号标准品加入 150μl 标准品稀释液
0.5 U/L 2 号标准品 150μl 的3 号标准品加入 150μl 标准品稀释液
0.25 U/L 1 号标准品 150μl 的2 号标准品加入 150μl 标准品稀释液
2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、
待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液 40μl,
然后再加待测样品 10μl(样品zui终稀释度为 5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽
量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3. 温育:用封板膜封板后置 37℃温育30 分钟。
4. 配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30倍稀释后备用
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30秒后弃去,如此
重复5 次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶标试剂 50μl,空白孔除外。
7. 温育:操作同 3。
8. 洗涤:操作同 5。
9. 显色:每孔先加入显色剂 A50 μl,再加入显色剂 B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色
15分钟.
10. 终止:每孔加终止液 50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11. 测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止
液后15分钟以内进行。
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