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猴免疫球蛋白M(IgM)Elisa试剂盒分析使用

阅读:563发布时间:2013-05-16

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猴免疫球蛋白M(IgM)操作步骤
1.  标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
16µg/ml  5号标准品  150µl 的原倍标准品加入150µl标准品稀释液
8.0µg/ml  4号标准品  150µl 的5号标准品加入150µl标准品稀释液
4.0µg/ml  3号标准品  150µl 的4号标准品加入150µl标准品稀释液
2.0µg/ml  2号标准品  150µl 的3号标准品加入150µl标准品稀释液
1.0µg/ml  1号标准品  150µl 的2号标准品加入150µl标准品稀释液 
2.  加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50µl,待测样品孔中先加样品稀释液40µl,然后再加待测样品10µl(样品zui终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3.  温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。     
4.  配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5.  洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此
重复5次,拍干。
6.  加酶:每孔加入酶标试剂50µl,空白孔除外。  
7.  温育:操作同3。
8.  洗涤:操作同5。
9.  显色:每孔先加入显色剂A50µl,再加入显色剂B50µl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10分钟.
10.  终止:每孔加终止液50µl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11.  测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。  测定应在加终止
液后15分钟以内进行。

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猴免疫球蛋白M(IgM)标本要求  
1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能
马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。


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