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牛布氏杆菌（brucellosis） 操作步骤
1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀
释。
240pg/ml 5 号标准品 150µl 的原倍标准品加入 150µl 标准品稀释液
120pg/ml 4 号标准品 150µl 的5 号标准品加入 150µl 标准品稀释液
60pg/ml 3 号标准品 150µl 的4 号标准品加入 150µl 标准品稀释液
30pg/ml 2 号标准品 150µl 的3 号标准品加入 150µl 标准品稀释液
15pg/ml 1 号标准品 150µl 的2 号标准品加入 150µl 标准品稀释液
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、
待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50µl，待测样品孔中先加样品稀释液 40µl，
然后再加待测样品 10 µl（样品zui终稀释度为 5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽
量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。
4. 配液：将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此
重复5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂 50µl，空白孔除外。
7. 温育：操作同 3。
8. 洗涤：操作同 5。
9. 显色：每孔先加入显色剂 A50µl，再加入显色剂 B50µl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
15分钟.
10. 终止：每孔加终止液50µl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止
液后15 分钟以内进行。
牛布氏杆菌（brucellosis） 试剂盒组成
1 30倍浓缩洗涤液 20ml×1 瓶 7 终止液 6ml×1 瓶
2 酶标试剂 6ml×1 瓶 8 标准品（480pg/ml） 0.5ml×1 瓶
3 酶标包被板 12孔×8 条 9 标准品稀释液 1.5 ml×1 瓶
4 样品稀释液 6ml×1 瓶 10 说明书 1 份
5 显色剂 A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 张
6 显色剂 B 液 6ml×1/ 瓶 12 密封袋 1 个
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