大鼠抗心磷脂抗体IgA（ACA-IgA）elisa试剂盒使用说明书

操作步骤

1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在*、第二孔中分别加标准品100μl，然后在*、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从*孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为1800ng/L，1200ng/L ，600ng/L，300ng/L， 150ng/L）。

2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品zui终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4. 配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。

5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7. 温育：操作同3。

8. 洗涤：操作同5。

9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟. 

10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

试剂盒组成：

封板膜:2片（48）/2片（96）

说明书:1份

密封袋:1个

标准品：   2700ng/L 0.5ml×1瓶 0.5ml×1瓶  2-8℃保存

酶标包被板:  1×48     1×96         2-8℃保存

样品稀释液: 3ml×1瓶  6 ml×1瓶     2-8℃保存

显色剂A液: 3ml×1瓶 6 ml×1瓶     2-8℃保存

显色剂B液: 3ml×1瓶 6 ml×1瓶     2-8℃保存

终止液:     3ml×1瓶 6ml×1瓶     2-8℃保存

浓缩洗涤液:（20ml×20倍）×1瓶 （20ml×30倍）×1瓶   2-8℃保存

实验原理：

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠抗心磷脂抗体IgA（ACA-IgA）水平。用纯化的大鼠抗心磷脂抗体IgA（ACA-IgA）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入抗心磷脂抗体IgA（ACA-IgA），再与HRP标记的抗心磷脂抗体IgA（ACA-IgA）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的抗心磷脂抗体IgA（ACA-IgA）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大鼠抗心磷脂抗体IgA（ACA-IgA）浓度。

目的：本试剂盒用于测定大鼠血清，血浆及相关液体样本中抗心磷脂抗体IgA（ACA-IgA）的含量。

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