马乙型脑炎病毒酶联免疫分析（ELISA）

试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

药品名称：

通用名：马蓝耳病毒酶联免疫分析试剂盒

使用目的：

本试剂盒用于定性测定马血清，血浆及相关液体样本中乙型脑炎病毒。

实验原理

本试剂盒采用间接法测定标本中马乙型脑炎病毒。用纯化的乙型脑炎病毒抗体包被微孔板，制成固相抗体，与样品中乙型脑炎病毒温育后，加入*标记的抗IgG抗体，再与链霉亲和素-HRP结合，形成免疫复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），与CUTOFF值相比较，从而判定标本中马乙型脑炎病毒的存在与否。， 

试剂盒组成 

标本要求 

1．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

2．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

操作步骤

1. 编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照2孔、阳性对照2孔、空白对照（不加样品，*标记的抗-IgG抗体，链霉亲和素-HRP，其余操作相同）1孔

2. 加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50μl。然后在待测样品孔先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，37℃温育45分钟。

3. 配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用

4. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复4次，拍干。

5. 加*标记的抗-IgG抗体：每孔加入*标记的抗-IgG抗体50μl（空白孔除外）。37℃温育30分钟

6. 洗涤：操作同4。

7. 加链霉亲和素-HRP：每孔加入50μl的链酶亲和素-HRP（空白孔除外），轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。

8. 洗涤：操作同4。

9. 显色：每孔先加入显色剂A 50μl，再加入显色剂B 50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.

10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

结果判定：

  试验有效性：阳性对照孔平均值≥1.00; 阴性对照平均值≤0.10

  临界值（CUT OFF）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15

  阴性判定：样品OD值< 临界值（CUT OFF）者为马乙型脑炎病毒阴性

  阳性判定：样品OD值≥ 临界值（CUT OFF）者为马乙型脑炎病毒阳性

注意事项

1．操作严格按照说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用。

2．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

3．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

4． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

5．底物请避光保存。

6．试验结果判定必须以酶标仪读数为准，使用双波长检测时，参考波长为630nm

7．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为2M的硫酸，使用时必须注意安全。

规格：

96人份/盒

保存条件及有效期

1．试剂盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6个月

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