葡聚糖凝胶是一种具有三维网状结构的高分子化合物,它是由葡聚糖加入交联剂环氧氯丙烷通过醚键互相交联聚合而成的,交联度越大,网孔结构就越紧密,吸水后的体积膨胀就越小,能允许进入凝胶内部的分子的分子量也就越小,反之亦然.层 析时,大于凝胶孔径的大分子,被阻于凝胶相外,沿着凝胶颗粒之间的间隙走,下移速度zui快,故zui先洗脱下来,中分子物质部份进入凝胶内部,洗脱速度为其次,而小分子物质因全部进入凝胶,受到阻力zui大,故zui后被洗脱下来,如此物质得到分离.型号G表明每克于凝胶吸水量的多少,例G-25表明每克干凝脱胶吸水2.5毫升.这表征了凝胶所能膨胀的倍数,亦间接表征了凝胶孔径的大小.

凝胶目数表明颗粒的大小,目数值越大,颗粒愈细,分离效果愈好,但粒子太细将影响流速,造成洗脱时间过长,易造成生物制品的变质.反之,粒子太粗则洗脱过快,峰型不集中,分离效果不佳.

装柱前,凝胶须充分膨胀,若在柱中尚继续膨胀,会造成凝胶挤压变形,堵塞通道,失去分离性能.对于G-75上的软胶,尤其要注意.软胶还须十分注意不要超工作压力运作,因为软胶的钢性较小,容易挤压变形,导至柱子堵塞,此外,长期使用常会引入一些不溶解杂质或因压得较紧而流速渐减,故必要时应洗胶并重新装柱.

国产凝胶的粒度分级往往不是很*,凝胶经膨胀后装柱前,应倾去在水中难已沉淀的极细微粒,免使影响流速.

Sephadex G型主要物理性质           zui低膨胀时间

型号 吸水量ml/g  床体积ml/g  分离范围 [肽类和球蛋白]  zui大工作压力[cm水压]  [沸水浴]

G-10      1         2~3              70               >100              1小时

G-15      1.5        2.5~3.5          1500              >100              1小时

G-25      2.5        4~6             1000-5000         >100              1小时

G-50      5.0        9-11             1500-30000        >100              2小时

G-75       7.5       12-15            3000-70000        50               3小时

G-100      10.0       15-20           4000-150000        35               5小时

G-150      15.0        20~30           5000-400000        15               5小时

G-200      20.0        30~40           5000-800000       10            5小时