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技术文章

吡啰红甲基绿染色液

点击次数:559 发布时间:2013-11-13

1、原理与解析
(1)真核细胞的DNA主要分布在细胞核内,RNA主要分布在细胞质中。
(2)甲基绿和吡罗红两种染色剂对DNA和RNA的亲和力不同,甲基绿对DNA亲和力强,使DNA显现出绿色,而吡罗红对RNA的亲和力强,使RNA呈现出红色。用甲基绿、吡罗红的混合染色剂将细胞染色,可同时显示DNA和RNA在细胞中的分布。
(3)盐酸的作用
① 盐酸能改变细胞膜的通透性,加速染色剂的跨膜运输;
② 盐酸使染色体中的DNA与蛋白质分离,便于DNA与染色剂的结合。
注意事项
1.材料的选择
① 选用的实验材料既要容易获得,又要便于观察;
② 常用的观察材料由人的口腔上皮细胞、洋葱鳞片叶表皮细胞(为避免原有颜色的干扰,不可使用紫色表皮细胞)
2.取材要点
① 取口腔上皮细胞之前,应先漱口,以避免装片中出现太多的杂质;
② 取洋葱表皮细胞时,尽量避免材料上带有叶肉组织细胞。
3.冲洗载玻片时水的流速要尽量慢,切忌直接用水冲洗。
4.安全要点
① 用酒精灯烘烤载玻片时,不要只集中于材料处,而应将载玻片在火焰上来回移动,使载玻片均匀受热,以免破裂;
② 烘烤后的载玻片不要马上放入盛有*的烧杯中,先自然冷却1分钟。
5.换用高倍镜观察材料时,只能用细准焦螺旋进行调焦,切不可动粗准焦螺旋。
主要步骤(以观察口腔上皮细胞为例)
1.取材
① 滴: 在洁净的载玻片上滴一滴质量分数为0.9%的NaCl溶液;
② 刮: 用消毒牙签在口腔内侧壁上轻轻地刮几下;
③ 涂: 将牙签上的碎屑涂抹在载玻片的生理盐水中;
④ 烘: 将涂有口腔上皮细胞的载玻片在酒精灯的火焰上烘干。
2.水解
① 解: 将烘干的载玻片放入装有30ml质量分数为8%的盐酸的小烧杯中,进行材料的水解;
② 保: 将小烧杯放入装有30℃温水的大烧杯中保温5分钟。
3.冲洗涂片
① 冲: 用缓缓的蒸馏水冲洗载玻片10秒钟;
② 吸: 用吸水纸吸去载玻片上的水分。
4.染色
① 染:用2滴吡罗红甲基绿混合染色剂滴在载玻片上,染色5分钟;
② 吸: 吸去多余染色剂;
③ 盖: 盖上盖玻片。
5.观察
① 低: 在低倍物镜下,寻找染色均匀,色泽浅的区域,移至视野*,将物像调节清晰;
② 高: 转到高倍物镜,调节细准焦螺旋,观察细胞核和细胞质的染色情况。

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