此方法适用于小量质粒DNA 的提取提取的质粒 DNA 可直接用于酶切PCR 扩增 。
1. 取 1.5ml 细菌培养物于 EP 管中，4000rpm 离心 1 分钟，弃上清液，使细菌沉 淀尽量干燥；
2. 将细菌沉淀重悬于用冰预冷的 100 µl 溶液 I （50 mmol/L 葡萄糖，10 mmol/L EDTA pH 8.0，25 mmol/L Tris-HCl pH 8.0） 中，剧烈振荡；
3. 加入 200 µl 新配制的溶液 II（0.2 mol/L NaOH，1％SDS （m/v）），盖紧 EP 管 口，快速颠倒离心管 5 次，以混合混合物，确保离心管的整个内表面与溶液 II 接触，不要涡旋，置于冰浴中；
4. 加入 150 µl 预冷溶液 III（每 100 ml 的溶液 III 中含 60 ml 5 mol/L 乙酸钾，11 .5 ml 冰乙酸，28.5 ml H2O），盖紧 EP 管口，反复颠倒数次，使溶液 III 在粘稠 的细菌裂解物中分散均匀，之后将管置于冰上 3~5 分钟；
5. 在zui大转速下离心 5min，取上清液于另一新 EP 管；
6. 用两倍体积的乙醇室温沉淀双链 DNA，振荡混合于室温放置 2 分钟，zui大转 速离心 5 分钟；
7.管壁的液滴除尽；
8. 加 1ml 70％乙醇洗涤沉淀，振荡混合，用 12,000g 离心 2 分钟，弃上清，将 开口的 EP 管置于室温使乙醇挥发，直至 EP 管中内没有可见的液体存在（5～
10 分钟），用适量的 ddH2O 溶解；
9. 用 0.5µl 的 RN ase 37℃温育 5~10 分钟；
10. 电泳鉴定。