苏木素伊红(HE)染色试剂盒

一、苏木素伊红(HE)染色试剂盒简介：

苏木素(Hematoxylin)和伊红(Eosin)染色，简称HE染色，是病理学常规制片中zui基本的染色方法，应用机器广泛。苏木精是从原产中南美的洋苏木中提取出来的浅黄褐色的结晶，是一种碱性染色剂，它在被氧化后生成苏木素，同媒染剂(常用的是三价的铝或盐铁)一起使用，能够使细胞核染色。在病理诊断、教学和科研工作中，常用HE染色对正常组织和病变组织进行形态结构观察。对于确定或鉴别病变组织、细胞中出现的某些异常物质与特殊成分，而需要采用的特殊染色方法、酶组织化学方法、免疫组织化学方法等也均是在观察HE染色组织切片的基础上进行的。在HE染色的组织切片中，细胞核呈蓝色，细胞浆呈红色，二者形成鲜明的对比，易于观察分析。

森贝伽生物苏木素伊红染色试剂盒中，*采用进口的高纯度苏木精、硫酸铝钾、甘you等组成，不含氧化gong、甲醇等有害物质，对细胞核染色效果好。其特点：长期保存，不易产生沉淀和金属;应用范围广，可以用于人、动物、畜牧、水产等领域，可以用于组织石蜡切片、冰冻切片和组织细胞的染色等；*可以重复使用。

二、苏木素伊红(HE)染色试剂盒染色原理：

1、细胞核染色的原理：

苏木素为碱性天然染料，可使细胞核着色。细胞核内染色质的成分主要是DNA，在DNA双螺旋结构中，两条核苷酸链上的磷酸基向外，使DNA双螺旋的外侧带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木素碱性染料以离子键或氢键结合而被染色。苏木素在碱性溶液中呈蓝色，所以细胞核被染成蓝色。2、细胞浆染色的原理：

伊红是一种化学合成的酸性染料，在一定条件下可使细胞浆着色。细胞浆的主要成分是蛋白质，为两性化合物，细胞浆的染色与染液的pH值密切相关。当染液的pH值在胞浆蛋白质等电点(4.7～5.0)以下时，胞浆蛋白质以碱式电离，则细胞浆带正电荷，就可被带负电荷的酸性染料染色。伊红在水中离解成带负电荷的阴离子，与胞浆蛋白质带正电荷的阳离子结合，使细胞浆着色，呈现红色。3、分化作用：

染色后，用某些特定的溶液将组织过多结合的染色剂脱去，这个过程称为分化作用，所用的溶液称为分化液。在HE染色中常用1%盐酸乙醇作为分化液，因酸能破坏苏木素的醌型结构，使组织与色素分离而退色。经苏木素染色后，必须用1%盐酸乙醇分化，使细胞核过多结合的苏木素染料和细胞浆吸附的苏木素染料脱去，再进行伊红染色，才能保证细胞核与细胞浆染色的分明。4、返蓝作用：分化之后，苏木素在酸性条件下处于红色离子状态，呈红色；在碱性条件下处于蓝色离子状态，呈蓝色。组织切片经酸性乙醇分化后呈红色或粉红色，故分化之后，立即用水除去组织切片上的酸而中止分化，再用弱碱性水使苏木素染上的细胞核呈现蓝色，这个过程称为返蓝作用或蓝化作用。另外用自来水浸洗也可使细胞核返蓝，但所需时间较长。

三、苏木素伊红(HE)染色试剂盒组成：

试剂(A):改良Lillie-Mayer*100ml500mlRT避光

试剂(B):伊红染色液100ml500mlRT避光

四、苏木素伊红(HE)染色试剂盒成分：

试剂(A):主要由苏木素、甘you等组成。试剂(B):主要由伊红、防腐剂、氧化剂等组成。

自备材料：

1、1%酸性乙醇分化液,亦可采购酸性乙醇分化液

2、弱碱性水，亦可采购氨水溶液(0.1%)

3、*水溶液,亦可采购*水溶液(1%)

4、无水乙醇、95%乙醇、90%乙醇、80%乙醇等系列乙醇

5、4%的多聚甲醛，亦可采购多聚*(4%PFA)

五、操作步骤（仅供参考）：

石蜡切片染色

1、切片脱蜡至水

①二甲苯作用2次，每次5～10min。

②（可选）无水乙醇作用2次，每次3～5min。

③95%的乙醇3～5min

④90%的乙醇3～5min

⑤80%的乙醇3～5min

⑥自来水或蒸馏水冲洗1～3min

2、染色

①改良Lillie-Mayer*染色5～8min

②自来水或蒸馏水冲洗5～10s

③1%酸性乙醇分化（可以省略）2～5s

④自来水冲洗20～30s

⑤弱碱性水(如0.2%氨水或1%*)返蓝20～40s

⑥自来水冲洗30～60s

⑦伊红染色液染色3～5min

⑧自来水冲洗1～5s2、脱水、透明、封固

80%乙醇10～20s

②90%乙醇10～20s

③95%乙醇作用2次，每次1～2min。

④无水乙醇作用2次，每次2～3min。

⑤二甲苯透明3次，每次2～3min。

⑥中性树脂封片。

染色结果：细胞核呈蓝色；细胞质、肌纤维、胶原纤维、甲状腺胶质等呈深浅不一的红色；角蛋白、红细胞等呈明亮的橙红色。

（二）冰冻切片染色

1、乙mi-乙醇混合固定液5～10s

2、自来水冲洗2～5s

3、改良Lillie-Mayer*滴染1～2min(可加热至50℃)。

4、自来水冲洗2～5s

5、1%的酸性乙醇分化液（可选）2～5s

6、自来水冲洗2～5s

7、弱碱性水(如0.2%氨水或1%*)返蓝2～5s

8、自来水冲洗5～10s

9、伊红染色液染色2～5s

10、水洗1～2s

11、80%的乙醇1～2s

12、95%的乙醇1～2s

13、无水乙醇2～5s

14、*二甲苯（1:3）2～5s

15、二甲苯透明3次，每次2～5s。

16、中性树脂封片

六、备选方案：

1、无需脱蜡，直接迅速用蒸馏水冲洗2～3min.

2、染色、脱蜡、透明、封固步骤同石蜡切片的染色步骤。染色结果：细胞核呈蓝色；细胞质、纤维呈红色。（三）细胞染色

1、4%的多聚甲醛固定10～20min。2、自来水冲洗2次，每次2min。3、蒸馏水冲洗2次，每次2min。

4、染色、脱蜡、透明、封固步骤同石蜡切片的染色步骤。染色结果：细胞核呈蓝色；细胞质、纤维呈红色。

七、注意事项：

1、切片脱蜡应尽量干净。

2、95%乙醇、90%乙醇、80%乙醇应经常更换新液。

3、1%的酸性乙醇分化液的分化时间应该依据切片厚薄、组织的类别和1%的盐酸乙醇分

化液的新旧而定，另外分化后自来水冲洗时间应该足够，以便*清洗酸。

4、乙mi-乙醇混合固定液是由乙mi和95%乙醇等量混合而得，再加入适量乙酸，密闭保存。5、冷冻切片染色时间尽量要短。

6、促蓝液常使用0.2～1%氨水水溶液或Scoot促蓝液或0.1～1%*水溶液。7、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

八、有效期：12个月有效。