鸡马立克氏病病毒（MDV）酶联免疫分析（ELISA）

试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

使用目的： 本试剂盒用于检测鸡血清，血浆及相关液体样本中马立克氏病病毒（MDV）水平。

实验原理 本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫法（ELISA）测定标本中鸡马立克氏病病毒（MDV）。

用纯化的马立克氏病病毒（MDV）抗体包被微孔板，制成固相抗体，可与样品中马立克氏 病病毒（MDV）相结合，经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后再与 HRP 标记的马立克氏 病病毒（MDV）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值），与 CUTOFF 值相比较，从而判定标本中鸡马立克氏 病病毒（MDV）的存在与否。

试剂盒组成

标本要求

1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能 马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

2．不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 操作步骤

1.    编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照 2 孔、阳性对照 2 孔、空白对照 1

孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）

2.    加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照 50µl。然后在待测样品孔先加样品稀释液 40µl，然后再加待测样品 10µl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触 及孔壁，轻轻晃动混匀，

3.    温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。

4.    配液：将 30（48T 的 20 倍）倍浓缩洗涤液加蒸馏水至 600ml 后备用

5.    洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此 重复 5 次，拍干。

6.    加酶：每孔加入酶标试剂 50µl，空白孔除外。

7.    温育：操作同 3。

8.    洗涤：操作同 5。

9.    显色：每孔先加入显色剂 A 50µl，再加入显色剂 B 50µl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色